邊雞屠宰性能的分子遺傳標(biāo)記及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及家禽育種領(lǐng)域，具體涉及一種邊雞屠宰性能的分子遺傳標(biāo)記及應(yīng)用。本發(fā)明公開(kāi)了肌肉生長(zhǎng)抑制素（myostatin,）基因作為邊雞屠宰性能分子遺傳標(biāo)記的應(yīng)用。具體是擴(kuò)增得到MSTN基因（162bp）的目的片段，目的片段經(jīng)限制性內(nèi)切酶BbvI酶切，凝膠電泳后用銀染顯色，得到DNA的酶切圖譜，根據(jù)圖譜中條帶的數(shù)量和大小對(duì)待測(cè)樣本的屠宰性能進(jìn)行判斷和和并選擇符合育種目的的樣本；其中僅有162bp條帶的為屠宰性能高的純合型樣本，僅有127bp條帶的為屠宰性能低的純合型樣本。本發(fā)明方法簡(jiǎn)單快捷，且不受外界環(huán)境的影響，可以用于邊雞屠宰性能的分子遺傳標(biāo)記，進(jìn)行標(biāo)記輔助選擇。
【專利說(shuō)明】邊雞屠宰性能的分子遺傳標(biāo)記及應(yīng)用【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及家禽育種領(lǐng)域，具體涉及一種用分子標(biāo)記提高邊雞屠宰性能的方法?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]屠宰性能是衡量雞種性能最重要的依據(jù)之一，是肉雞育種工作者著力改良的性狀。屠宰性狀為數(shù)量性狀，由多基因控制，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，遺傳學(xué)家和育種學(xué)家認(rèn)識(shí)到控制數(shù)量性狀的基因并非在基因組中隨機(jī)分布，且存在影響數(shù)量性狀的主效基因。目前，在育種中對(duì)雞屠宰性能的篩選方法主要是通過(guò)傳統(tǒng)育種方法，因此周期長(zhǎng)，效率低下，尋找到合適的DNA標(biāo)記用于屠宰性能的輔助選擇能增強(qiáng)選擇的準(zhǔn)確性、加快遺傳進(jìn)展。
[0003]肌肉生長(zhǎng)抑制素(myostatin，MSTN)基因，也稱生長(zhǎng)分化因子-8基因，研究證實(shí)它具有抑制骨骼肌生長(zhǎng)的作用，是骨骼肌生長(zhǎng)的負(fù)調(diào)控因子，主要通過(guò)抑制MyoD家族成員的轉(zhuǎn)錄活性負(fù)向調(diào)控肌細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育。因而研究肌肉生長(zhǎng)抑制素基因的突變對(duì)雞屠宰性能的影響，進(jìn)而用于標(biāo)記輔助選擇具有很大的可能性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種利用分子標(biāo)記提高邊雞屠宰性能的方法，該方法利用MSTN基因BbvI酶切圖譜對(duì)邊雞屠宰性能進(jìn)行標(biāo)記輔助選擇，不受環(huán)境影響。
[0005]本發(fā)明公開(kāi)了 MSTN基因作為邊雞屠宰性能分子遺傳標(biāo)記的應(yīng)用。
[0006]基于上述應(yīng)用的利用分子標(biāo)記提高邊雞屠宰性能的方法是:提取待測(cè)樣本的基因組DNA，經(jīng)序列如SEQ ID NO: 1_2所示的特異性引物擴(kuò)增得到162bp的目的片段，目的片段經(jīng)限制性內(nèi)切酶BbvI酶切，`凝膠電泳后用銀染顯色，得到DNA的酶切圖譜，根據(jù)圖譜中條帶的數(shù)量和大小對(duì)待測(cè)樣本的屠宰性能進(jìn)行判斷并選擇符合育種目的的樣本。僅有162bp條帶的為屠宰性能高的純合型樣本，僅有127bp條帶的為屠宰性能低的純合型樣本。
[0007]本發(fā)明的原理是:利用前期研究發(fā)現(xiàn)的MSTN基因外顯子I的BbvI酶切位點(diǎn)，針對(duì)該位點(diǎn)設(shè)計(jì)特異性引物擴(kuò)增邊雞基因組DNA，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)BbvI酶切產(chǎn)生3種基因型(GG、GA和AA)。該單核苷酸突變能穩(wěn)定遺傳，選擇的檢測(cè)方法簡(jiǎn)單快捷，且不受外界環(huán)境的影響，可以用于邊雞屠宰性能的分子遺傳標(biāo)記，進(jìn)行標(biāo)記輔助選擇。
[0008]所述分子遺傳標(biāo)記在應(yīng)用于育種篩選時(shí)，選擇MSTN基因中不含BbvI酶切位點(diǎn)的個(gè)體，即屠宰性能高的純合型樣本(AA型)。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0009]圖1是MSTN基因BbvI酶切產(chǎn)物圖，Marker為GM331。
【具體實(shí)施方式】
[0010]實(shí)施例1[0011]1.試驗(yàn)材料
[0012]第7世代邊雞核心群母雞血樣299份、公雞血樣81份，所建立的第一世代AA系和GG系母雞各50只均采自山西省農(nóng)科院畜牧獸醫(yī)研究所。用肝素鈉作為抗凝劑，從第7世代邊雞核心群母雞靜脈各采集血樣0.5mL,采用常規(guī)苯酚-氯仿法抽提基因組DNA，測(cè)定DNA的濃度后備用。
[0013]2.引物設(shè)計(jì)和PCR擴(kuò)增
[0014]2.1酶切引物的設(shè)計(jì)
[0015]根據(jù)GenBank中雞MSTN基因序列(GenBank登錄號(hào)為AF346599)針對(duì)外顯子I的BbvI位點(diǎn)設(shè)計(jì)I對(duì)引物，擴(kuò)增產(chǎn)物大小為162bp。引物序列如下:
[0016]Pl:F:5/ -GCATTAGCAGGGACGTTAT-3' (SEQ ID NO:1)
[0017]R:5/ -ACTCCGTAGGCATTGTGAT-3' (SEQ ID NO:2)
[0018]2.2PCR 擴(kuò)增
[0019]PCR擴(kuò)增反應(yīng)為25 μ L體系，包括:上、下游引物(10 μ mol/L)2 μ L ；dNTPs (2mmol/L) 2.5μ L ；Taq DNA 聚合酶(5U/μ L) 0.2 μ L ;DNA 模板(50ng/μ L) 2 μ L ；Mg2+ (25mmol/L)
1.5μ L ;10XPCI^^4^2.5yL ;超純水 14.3 μ L0 PCR 擴(kuò)增反應(yīng)程序:94°C 變性 6min ；94°C變性30s，56。。復(fù)性30s，72。。延伸30s，進(jìn)行30個(gè)循環(huán)；最后72°C延伸IOmin ;10°C保存。
[0020]PCR反應(yīng)完成后，用10%的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)擴(kuò)增結(jié)果，硝酸銀染色，UV凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行凝膠成像。
[0021 ] 2.3PCR-RFLP 檢測(cè)及選育
[0022]PCR產(chǎn)物用BbvI酶切，以檢測(cè)多態(tài)性。酶切反應(yīng)總體積為20 μ L，超純水16.5 μ L，BbvI 酶(lOu/μ L)0.5μ L，10Xbuffer2y L，37°C酶切 2h，酶切產(chǎn)物用交聯(lián)度為(Acr:Bis)29:1的10%的非變性聚丙烯酰胺凝膠檢測(cè)，200V電泳5h，硝酸銀染色。酶切圖譜如圖1所示，顯示3種基因型，僅有162bp目的片段的樣本不含BbvI酶切位點(diǎn)，命名為AA型；僅有127bp的為含有BbvI酶切位點(diǎn)的純合型，命名為GG型；同時(shí)含有162bp和127bp的為雜合型樣本，命名為GA型。當(dāng)編碼區(qū)234bp處為G時(shí)，BbvI酶切產(chǎn)生127bp和35bp的片段；當(dāng)C.234bp處為A時(shí)，無(wú)BbvI酶切位點(diǎn)。
[0023]根據(jù)邊雞公母雞MSTN基因BbvI酶切圖譜中條帶的數(shù)量和大小辨別擴(kuò)增產(chǎn)物中是否含有BbvI酶切位點(diǎn)。根據(jù)基因型判定結(jié)果分別選留AA型公母雞以及GG型公母雞作為種雞。人工受精后米集種蛋，建立AA和GG系邊雞群體。
[0024]2.4邊雞AA和GG系母雞屠宰性能的比較
[0025]在16周齡時(shí)，分別屠宰50只建立的AA和GG系母雞，測(cè)定其屠宰性狀。AA和GG系母雞屠宰性能的比較結(jié)果見(jiàn)表1。由表可見(jiàn)，AA系的屠體重、全凈膛重、半凈膛重、胸肌重、腿肌重、胸肌率都極 顯著的高于GG系(P〈0.01)，分別高出18.6%、19.5%、19.0%、27.3%、
19.9%和6.5%。在育種時(shí)選擇AA型(即不含BbvI酶切位點(diǎn)的MSTN基因)可作為邊雞屠宰性能的分子標(biāo)記輔助選擇方法。
[0026]表1邊雞母雞AA和GG系屠宰性能的比較
[0027]
【權(quán)利要求】
1.肌肉生長(zhǎng)抑制素基因MSTN作為邊雞屠宰性能分子遺傳標(biāo)記的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述應(yīng)用是:提取待測(cè)樣本的基因組DNA，經(jīng)序列如SEQ ID NO:1-2所示的特異性引物擴(kuò)增得到162bp的目的片段，目的片段經(jīng)限制性內(nèi)切酶BbvI酶切，凝膠電泳后用銀染顯色，得到DNA的酶切圖譜，根據(jù)圖譜中條帶的數(shù)量和大小對(duì)待測(cè)樣本的屠宰性能進(jìn)行判斷和和并選擇符合育種目的的樣本；其中僅有162bp條帶的為屠宰性能高的純 合型樣本，僅有127bp條帶的為屠宰性能低的純合型樣本。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK103820550SQ201410066978
【公開(kāi)日】2014年5月28日 申請(qǐng)日期:2014年2月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月26日
【發(fā)明者】張跟喜, 丁馥香, 王金玉, 張麗, 謝愷舟, 戴國(guó)俊, 張李俊 申請(qǐng)人:揚(yáng)州大學(xué)