專利名稱：一種中藥組合物制劑及制備方法和質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥組合物制劑及制備方法和質(zhì)量控制方法，特別涉及一種清熱解毒、消炎的中藥組合物制劑及制備方法和質(zhì)量控制方法。

背景技術(shù)：
炎癥是指具有血管系統(tǒng)的活體組織對各種損傷因子的刺激所發(fā)生的一種以防御反應(yīng)為主的基本病理過程。局部的血管反應(yīng)是炎癥過程的主要特征和防御反應(yīng)的中心環(huán)節(jié)。炎癥的局部表現(xiàn)為紅、腫、熱、痛和功能障礙，也伴有發(fā)熱、末梢血白細(xì)胞計(jì)數(shù)改變等全身反應(yīng)。
金銀花、黃芩作為清熱解毒、消炎的中藥，經(jīng)常被組合運(yùn)用，效果甚佳。但是現(xiàn)有技術(shù)在對該組合物的工藝及質(zhì)量進(jìn)行有效控制時，仍存在很多缺陷，有待進(jìn)一步提高。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種中藥組合物制劑；本發(fā)明第二個目的在于提供一種清熱解毒、消炎的中藥組合物制劑；本發(fā)明的第三個目的在于提供該中藥組合物制劑的制備方法；本發(fā)明的第四個目的在于提供該中藥組合物制劑的質(zhì)量控制方法。
本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的 本發(fā)明一種清熱解毒、消炎的中藥組合物制劑的原料組成為金銀花提取物10-50重量份、黃芩提取物5-30重量份、糊精60-180重量份、甜菊素0.5-2.0重量份。
本發(fā)明一種清熱解毒、消炎的中藥組合物制劑的原料組成優(yōu)選為金銀花提取物30重量份、黃芩提取物12重量份、糊精126.8重量份、甜菊素1.18重量份。
本發(fā)明一種清熱解毒、消炎的中藥組合物制劑的制備方法為取金銀花，加水煎煮1-3次，第一次加水6-10倍量煎煮1-3小時，第二次加水4-8倍量煎煮1-3小時，合并煎液，濾過，濾液加入石灰乳調(diào)節(jié)pH值至10～12，靜置，濾取沉淀，加水適量，用硫酸調(diào)節(jié)pH值至6～7，攪勻，濾過，濾液濃縮至稠膏狀，即得金銀花提取物；取黃芩，加至沸水中煎煮1-3次，每次0.5-1.5小時，合并煎煮液，濾過，濾液加硫酸調(diào)節(jié)pH值至1-3，靜置，濾取沉淀，用乙醇適量洗滌后，干燥，即得黃芩提取物；將金銀花提取物、黃芩提取物、糊精、甜菊素按比例混合，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成臨床或藥學(xué)上可接受的劑型，包括但不限于片劑、膠囊劑、散劑、軟膠囊劑、滴丸、蜜丸、丸劑、顆粒劑、蜜煉膏劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑、口服液體制劑、注射制劑或外用制劑。
本發(fā)明一種清熱解毒、消炎的中藥組合物無糖型顆粒劑的制備方法優(yōu)選為取金銀花，加水煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮2小時，第二次加水6倍量煎煮2小時，合并煎液，濾過，濾液加入石灰乳調(diào)節(jié)pH值至10～12，靜置，濾取沉淀，加水適量，用硫酸調(diào)節(jié)pH值至6～7，攪勻，濾過，濾液濃縮至稠膏狀，即得金銀花提取物；取黃芩，加至沸水中煎煮2次，每次1小時，合并煎煮液，濾過，濾液加硫酸調(diào)節(jié)pH值至2，靜置，濾取沉淀，用乙醇適量洗滌后，干燥，即得黃芩提取物；將金銀花提取物、黃芩提取物、糊精、甜菊素按比例混合，攪拌均勻，制成顆粒，60℃以下干燥，制成1000重量份，即得。
一種原料包含金銀花提取物、黃芩提取物的清熱解毒、消炎的中藥組合物制劑的質(zhì)量控制方法，該方法包括如下含量測定和/或微生物限度檢查法中的一種或兩種或三種 A、含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以5-15∶50-150比例的乙腈-0.4％磷酸溶液為流動相；檢測波長為327nm；理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品適量，加40％-60％甲醇制成每1ml含10-30μg的溶液，作為對照品溶液，5℃-15℃以下保存；供試品溶液的制備取中藥組合物制劑0.5-1.5g，研細(xì)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加40％-60％甲醇40-60ml，稱定重量，超聲處理20-40分鐘，放冷，再稱定重量，用40％-60％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液4-6ml，置15-35ml棕色容量瓶中，加40％-60％甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5-15μl，注入液相色譜儀，測定，即得； B、含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以45-65∶35-55比例的甲醇-2％醋酸溶液為流動相；檢測波長為260-300nm；理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取黃芩苷對照品適量，加60-80％乙醇制成每1ml含40-60μg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備取中藥組合物制劑0.5-1.5g，研細(xì)，精密稱定，置80-120ml量瓶中，加60-80％乙醇至刻度，功率240-260W，頻率40-60Hz條件下超聲處理20-40分鐘，放冷，用60-80％乙醇補(bǔ)足減失的量，搖勻，濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5-15μl，注入液相色譜儀，測定，即得； C、微微生物限度檢查法取供試品5-15g，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至80-120ml，振搖，使呈0.5-1.5∶5-15的供試品儲備液，取0.5-1.5∶5-15的供試品儲備液5-15ml，400-600轉(zhuǎn)/分離心3-8分鐘，取上清液加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液補(bǔ)至5-15ml，2800-3200轉(zhuǎn)/分離心10-30分鐘，取底部集菌液1-3ml，加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液補(bǔ)至5-15ml，即為0.5-1.5∶5-15的供試液；細(xì)菌檢查采用離心加稀釋法，取0.5-1.5∶5-15的供試液1ml，分別注入5個平皿中，每皿0.2ml，依中國藥典2005年版一部附錄XIIIC法檢查，霉菌、酵母菌檢查取0.5-1.5∶5-15的供試品儲備液，依常規(guī)中國藥典2005年版一部附錄XIIIC法檢查；大腸桿菌檢查取0.5-1.5∶5-15的供試品液，依中國藥典2005年版一部附錄XIIIC離心加稀釋法檢查；1g供試品中，細(xì)菌數(shù)不得過800-1200個，霉菌和酵母菌數(shù)不得過80-120個，大腸桿菌不得檢出。
上述質(zhì)量控制方法優(yōu)選包括如下含量測定 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以10∶90比例的乙腈-0.4％磷酸溶液為流動相；檢測波長為327nm；理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品適量，加50％甲醇制成每1ml含20μg的溶液，作為對照品溶液，10℃以下保存；供試品溶液的制備取中藥組合物中藥組合物制劑1.0g，研細(xì)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加50％甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色容量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
上述質(zhì)量控制方法中優(yōu)選包括如下微生物限度檢查法 微生物限度取供試品10g，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，振搖，使呈1∶10的供試品儲備液，取1∶10的供試品儲備液10ml，500轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，取上清液加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液補(bǔ)至10ml，3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，取底部集菌液2ml，加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液補(bǔ)至10ml，即為1∶10的供試液；細(xì)菌檢查采用離心加稀釋法，取1∶10的供試液1ml，分別注入5個平皿中，每皿0.2ml，依中國藥典2005年版一部附錄XIIIC法檢查，霉菌、酵母菌檢查取1∶10的供試品儲備液，依常規(guī)中國藥典2005年版一部附錄XIIIC法檢查；大腸桿菌檢查取1∶10的供試品液，依中國藥典2005年版一部附錄XIIIC離心加稀釋法檢查；1g供試品中，細(xì)菌數(shù)不得過1000個，霉菌和酵母菌數(shù)不得過100個，大腸桿菌不得檢出。
上述質(zhì)量控制方法中優(yōu)選包括如下含量測定 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以55∶45比例的甲醇-2％醋酸溶液為流動相；檢測波長為280nm；理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取黃芩苷對照品適量，加70％乙醇制成每1ml含50μg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備取中藥組合物中藥組合物制劑1.0g，研細(xì)，精密稱定，置100ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，功率250W，頻率50Hz條件下超聲處理30分鐘，放冷，用70％乙醇補(bǔ)足減失的量，搖勻，濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
上述質(zhì)量控制方法中藥組合物制劑優(yōu)選原料組成為金銀花提取物30重量份、黃芩提取物12重量份、糊精126.8重量份、甜菊素1.18重量份的無糖型顆粒劑，并通過如下方法制備取金銀花，加水煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮2小時，第二次加水6倍量煎煮2小時，合并煎液，濾過，濾液加入石灰乳調(diào)節(jié)pH值至10～12，靜置，濾取沉淀，加水適量，用硫酸調(diào)節(jié)pH值至6～7，攪勻，濾過，濾液濃縮至稠膏狀，即得金銀花提取物；取黃芩，加至沸水中煎煮2次，每次1小時，合并煎煮液，濾過，濾液加硫酸調(diào)節(jié)pH值至2，靜置，濾取沉淀，用乙醇適量洗滌后，干燥，即得黃芩提取物；將金銀花提取物、黃芩提取物、糊精、甜菊素按比例混合，攪拌均勻，制成顆粒，60℃以下干燥，制成1000重量份，即得無糖型顆粒劑。
上述質(zhì)量控制方法中藥組合物制劑優(yōu)選原料包含金銀花提取物100重量份、黃芩提取物40重量份的顆粒劑，并通過如下方法制備取金銀花，加水煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮2小時，第二次加水6倍量煎煮2小時，合并煎液，濾過，濾液加入石灰乳調(diào)節(jié)pH值至10～12，靜置，濾取沉淀，加水適量，用硫酸調(diào)節(jié)pH值至6～7，攪勻，濾過，濾液濃縮至稠膏狀，即得金銀花提取物；取黃芩，加至沸水中煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮1小時，第二次加水6倍量煎煮1小時，合并煎煮液，濾過，濾液加硫酸調(diào)節(jié)pH值至2，靜置，濾取沉淀，用乙醇適量洗滌后，干燥，即得黃芩提取物；取金銀花提取物100重量份、黃芩提取物40重量份，加庶糖粉800重量份與淀粉適量，攪拌均勻，制成顆粒，60℃以下干燥，制成1000重量份，即得顆粒劑。
上述質(zhì)量控制方法中藥組合物制劑優(yōu)選原料包含金銀花提取物100重量份、黃芩提取物40重量份的膠囊劑，并通過如下方法制備取金銀花，加水煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮2小時，第二次加水6倍量煎煮2小時，合并煎液，濾過，濾液加入石灰乳調(diào)節(jié)pH值至10～12，靜置，濾取沉淀，加水適量，用硫酸調(diào)節(jié)pH值至6～7，攪勻，濾過，濾液濃縮至稠膏狀，即得金銀花提取物；取黃芩，加至沸水中煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮1小時，第二次加水6倍量煎煮1小時，合并煎煮液，濾過，濾液加硫酸調(diào)節(jié)pH值至2，靜置，濾取沉淀，用乙醇適量洗滌后，干燥，即得黃芩提取物；取金銀花提取物100重量份、黃芩提取物40重量份，加淀粉適量，均勻，60℃以下干燥，分裝入膠囊，制成1000重量份，即得膠囊劑。



附圖1無糖型和含糖型顆粒吸濕性對比圖(A為含糖顆粒、B為無糖顆粒) 附圖2綠原酸的紫外全波長掃描圖 附圖3綠原酸含量測定流動相選擇圖(A綠原酸對照品、B銀黃顆粒、C缺金銀花陰性對照1綠原酸) 附圖4不同提取溶劑提取綠原酸提取率的比較圖 附圖5不同方法提取綠原酸提取率的比較圖 附圖6不同溶劑量提取綠原酸提取率的比較圖 附圖7不同提取時間提取綠原酸提取率的比較圖 附圖8透明容量瓶和棕色容量瓶對保存樣品溶液穩(wěn)定性的比較圖 附圖9保存溫度對樣品穩(wěn)定性影響圖 附圖10綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線圖 本發(fā)明一種清熱解毒、消炎的中藥組合物制劑由于其原料的特定配比選擇，實(shí)驗(yàn)證明具有成型良好等優(yōu)勢。
本發(fā)明一種清熱解毒、消炎的中藥組合物無糖型顆粒劑將傳統(tǒng)工藝中原有的蔗糖、淀粉改為糊精、甜菊素，使得其除了具有一般顆粒劑的特點(diǎn)外，還具有以下優(yōu)勢(1)藥物的穩(wěn)定性好它避免了含糖顆粒劑的易潮解、軟化變質(zhì)、不宜久存的不足，從而提高了藥物穩(wěn)定性，又保證了藥物的臨床療效。(2)減少了藥物賦形劑用量和改善了中藥制劑形象由于減少了大量使用的蔗糖等賦形劑的用量，故藥物的單劑包裝質(zhì)量大為減少，使藥物服用、攜帶均較為方便。(3)擴(kuò)大了應(yīng)用范圍因?yàn)檎崽蔷哂休^強(qiáng)的生物活性，能引發(fā)胃炎、導(dǎo)致肥胖、誘發(fā)糖尿病和兒童齲齒，使得顆粒劑不宜用于糖尿病等禁糖患者。中藥無糖顆粒劑的問世，使許多兒童、老年和禁糖患者的用藥限制得以解除。本發(fā)明無糖型顆粒劑同時改善了原有劑型的吸濕性問題。通過對比無糖型顆粒及含糖顆粒的吸濕百分率可以看出，無糖型顆粒的抗?jié)裥詮?qiáng)于含糖顆粒。通過臨床對比實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)本發(fā)明無糖型顆粒劑與原傳統(tǒng)工藝含糖型顆粒劑對二甲苯所致小鼠耳腫脹以及蛋清性大鼠足跖腫脹均有非常顯著的抑制作用、且無糖型顆粒劑療效優(yōu)于含糖型顆粒劑。
本發(fā)明一種清熱解毒、消炎的中藥組合物制劑按照中國藥典2005年版微生物限度檢查法首次進(jìn)行細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)的方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)及菌落計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明對于細(xì)菌、霉菌及酵母菌檢查采用離心加稀釋法進(jìn)行細(xì)菌檢查可消除本品的抑菌作用，采用常規(guī)法進(jìn)行本品霉菌和酵母菌檢查，方法可行；對于控制菌檢查，實(shí)驗(yàn)組控制菌生長良好，本品對大腸桿菌沒有抑菌作用。陰性菌均未檢出，表明該控制菌檢查方法的專屬性好。陽性對照試驗(yàn)檢出相應(yīng)控制菌，陰性對照無菌生長，可采用離心加稀釋法進(jìn)行本品的大腸桿菌檢查。本發(fā)明中藥組合物制劑還增加了綠原酸含量測定和黃芩苷含量測定，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明含量測定方法檢測專屬性好、穩(wěn)定性高、重現(xiàn)性好、精密度高，更加適合工業(yè)化的生產(chǎn)，真正確保了臨床用藥的安全、有效、可靠。
下面實(shí)驗(yàn)例和實(shí)施例用于進(jìn)一步說明但不限于本發(fā)明。
本發(fā)明所有實(shí)驗(yàn)例所選用的制劑均為根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例1制得的本發(fā)明顆粒劑，但是本發(fā)明實(shí)驗(yàn)結(jié)果并不僅限于該顆粒劑。
實(shí)驗(yàn)例1生產(chǎn)工藝篩選實(shí)驗(yàn) 1.藥材的鑒定與前處理 本方制劑及生產(chǎn)用藥材均依照中國藥典2005年版一部各項(xiàng)下中藥飲片所載相關(guān)品種標(biāo)準(zhǔn)鑒定和前處理。
黃芩本品為唇形科植物黃芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根。春、秋二季采挖，除去須根及泥沙，曬后撞去粗皮，曬干。應(yīng)符合《中國藥典》2005年版一部211頁黃芩項(xiàng)下規(guī)定。
金銀花本品為忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thuna.的干燥花蕾或帶初開的花。夏初花開前采收，干燥。檢驗(yàn)依據(jù)應(yīng)符合《中國藥典》2005年版一部152頁金銀花項(xiàng)下規(guī)定。
2.提取工藝 參照傳統(tǒng)銀黃顆粒提取工藝確定了無蔗糖顆粒的提取工藝參數(shù)。
2.1金銀花提取工藝 表1水提取工藝
表2石硫法提取工藝
2.2黃芩提取工藝 表3水提取工藝
表4酸沉工藝
3.制劑成型工藝研究 參考生產(chǎn)中的提取和制粒數(shù)據(jù)，改變制成量為原來的一半量，變更包裝規(guī)格為2g/袋，服用量和服用方法保持不變。采用無蔗糖顆粒常用輔料糊精和甜菊素，實(shí)驗(yàn)考察了制粒的工藝條件，初步確定了銀黃顆粒(無蔗糖)的制劑成型工藝，見表5。
表5銀黃顆粒(無蔗糖)制粒工藝考察
由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，實(shí)驗(yàn)組4的試驗(yàn)參數(shù)符合工藝的要求，在已有生產(chǎn)工藝下，銀黃無蔗糖顆粒成型良好，可進(jìn)行試制生產(chǎn)。
5、中試生產(chǎn)工藝研究 依照上述試驗(yàn)所確定的工藝，共進(jìn)行了3批批量分別為10000袋的中試規(guī)模生產(chǎn)，以考察工藝的穩(wěn)定性。生產(chǎn)數(shù)據(jù)見表5。
表5中試生產(chǎn)工藝數(shù)據(jù)
結(jié)果表明三批生產(chǎn)工藝均達(dá)到設(shè)計(jì)要求。說明大生產(chǎn)工藝穩(wěn)定。
以上述中試樣品分別作為質(zhì)量研究及穩(wěn)定性考察使用。
實(shí)驗(yàn)例2生產(chǎn)工藝對比實(shí)驗(yàn) 無糖型顆粒劑的優(yōu)點(diǎn)除了擴(kuò)大制劑的使用人群以外，同時改善了原有劑型的吸濕性問題。通過對比無糖型顆粒及含糖顆粒的吸濕百分率可以看出，無糖型顆粒的抗?jié)裥詮?qiáng)于含糖顆粒。
吸濕百分率的測定將稱量瓶烘至恒重，冷卻后準(zhǔn)確稱重，分別加入無糖型顆粒及含糖顆粒，在底部均勻攤成厚約2mm，打開瓶蓋105℃烘約5h至恒重，取出，干燥器中冷卻，準(zhǔn)確稱重。另將底部盛有NaCl過飽和溶液的干燥器放入25℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)24h，此時恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)的相對濕度為75％，將烘至恒重的藥粉瓶放入干燥器內(nèi)，打開瓶蓋，放入干燥器上部，于25℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)保存，每隔一定時間稱量一次，按下式計(jì)算各時間的吸濕百分率。結(jié)果見附圖1。
吸濕率(％)＝[(吸濕后藥粉重量-吸濕前藥粉重量)/吸濕前藥粉重]×100％ 通過無糖型和含糖型顆粒吸濕性的對比可以看出無糖型顆粒的抗?jié)裥悦黠@優(yōu)于含糖顆粒，無糖處方所制顆粒不易吸濕軟化，而含糖型顆粒粒易吸濕軟化粘連。
實(shí)驗(yàn)例3藥效學(xué)實(shí)驗(yàn) 1、銀黃顆粒對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響 試驗(yàn)方法小鼠30只，體重18～22g，雌雄各半，按體重隨機(jī)分為3組，即銀黃顆粒大、小劑量組、空白對照組，用藥組灌胃給藥，空白對照組給等量生理鹽水，連續(xù)3d，末次給藥30min后，在小鼠右耳廓涂二甲苯0.05mL，0.5h后處死動物，用6mm打孔器沿左右耳廓相同部位打孔取材，用扭力天平稱重，以耳片重差值作為腫脹度，并求出抑腫率。結(jié)果見表6。
抑腫率(％)＝[(空白組白組平均腫-給藥組平均腫脹率)/空白組白組平均腫]×100％ 表6銀黃顆粒對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響
＊＊P＜0.01 從表6可知銀黃顆粒對二甲苯所致小鼠耳腫脹有非常顯著的抑制作用。
2、銀黃顆粒對大鼠蛋清性足跖腫脹的影響 試驗(yàn)方法大鼠30只，體重180～200g，雌雄各半，按體重隨機(jī)分為3組，即銀黃顆粒大、小劑量組，、空白對照組。用毛細(xì)管放大法測量各組大鼠右后踝關(guān)節(jié)下相同位置的足跖體積。用藥組灌胃給藥3d，末次給藥后60min，在各組動物右后足跖皮下注射100％新鮮蛋清0.05mL，從末次給藥時計(jì)時，每隔2h測致炎后的大鼠足跖體積，致炎前后足跖體積差為腫脹率，結(jié)果見表7。
表7銀黃顆粒對蛋清性大鼠足跖腫脹的影響

＊＊P＜0.01 從表7可知銀黃顆粒對蛋清性大鼠足跖腫脹有非常顯著的抑制作用。
3、抗炎機(jī)制的研究 3.1炎性組織中組胺含量測定 試驗(yàn)的基本原理是將組織中所含組胺用酸化正丁醇提取，經(jīng)正庚烷處理除去干擾物質(zhì)，提高檢測結(jié)果的特異性萃取液在堿性條件下，與鄰苯二甲醛(OPT)縮合產(chǎn)生一強(qiáng)而穩(wěn)定的熒光物質(zhì)，于熒光分光光度計(jì)測定熒光強(qiáng)度以作組胺定量。取健康SD♂大鼠40只，體重120～150g，按體重隨機(jī)分為5組，灌胃。連續(xù)3d，末次給藥后1h，每只大鼠右后足跖部皮下注射10％的新鮮蛋清生理鹽水溶液0.1mL同時灌胃生理鹽水[4mL·(100g)-1]行水負(fù)荷。致炎后40min沿踝關(guān)節(jié)上0.5mm處剪下致炎足，剔除骨后稱重，劃破皮膚組織后浸泡于酸化正丁醇4.mL中4h，再用超聲波處理20min，去除組織，離心。取上清液2.5mL加正庚烷3.0mL及0.1mol·5min-1，得0.5mL水相2份，1份分別依次加入如下試劑注射用水1.5mL及0.4mol·L-1氫氧化鈉0.5mL混勻后再加0.1％的鄰苯二甲醛甲醇溶液0.1mL于22℃水浴中反應(yīng)10min，加0.5mol·L-1的鹽酸0.5mL終止反應(yīng)，于360nm激發(fā)，在450nm處測定熒光強(qiáng)度為組胺含量。另以0.1mol·L-1鹽酸0.5mL代替水相作為空白管，以2.5mL酸化正丁醇加0.05mL濃度為5mg·L-1的組胺鹽酸溶液代替樣品上清液為標(biāo)準(zhǔn)管，進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)所測熒光強(qiáng)度按下列公式計(jì)算組胺含量，并計(jì)算回收率為93％～100％，結(jié)果見表8。

表8VOCM對蛋清致大鼠足腫脹炎性足組織中組胺和5-羥色胺含量的影響

3.2炎性組織中5-HT含量測定 該原理是用稀鹽酸提取的5-HT在酸性條件下可與OPT縮合，生成熒光化合物。上述熒光化合物的熒光強(qiáng)度與深度在一定范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，因而可通過測定其熒光強(qiáng)度來進(jìn)行定量。取上述未處理過的水相分別依次加入如下試劑0.5％半胱氨酸0.1mL及6％的鄰苯二甲醛鹽酸溶液3mL，混勻后再加0.1mL0.02％碘酸鈉溶液，沸水浴10min，取出置水中冷卻，于365nm激發(fā)，在480nm處測定熒光強(qiáng)度為5-HT含量，計(jì)算方法同上。結(jié)果見表8。
本藥理研究證明，二甲苯所致小鼠耳腫脹及蛋清所致大鼠足跖腫脹是一種非特異性急性炎癥模型，主要表現(xiàn)為局部的充血、水腫及滲出。本實(shí)驗(yàn)顯示銀黃顆粒對二種腫脹均有明顯的抑制作用，抗炎機(jī)制與抑制傳統(tǒng)炎癥介質(zhì)組織胺、5-羥色胺的釋放有關(guān)。
實(shí)驗(yàn)例4藥效學(xué)對比實(shí)驗(yàn) 1、對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響 試驗(yàn)方法小鼠30只，體重18～22g，雌雄各半，按體重隨機(jī)分為3組，即無糖型及含糖型組和空白對照組，用藥組灌胃給藥，空白對照組給等量生理鹽水，連續(xù)3d，末次給藥30min后，在小鼠右耳廓涂二甲苯0.05mL，0.5h后處死動物，用6mm打孔器沿左右耳廓相同部位打孔取材，用扭力天平稱重，以耳片重差值作為腫脹度，并求出抑腫率。結(jié)果見表9。

表9含糖及無糖銀黃顆粒對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響對比試驗(yàn)
＊＊與空白對照組比較P＜0.01 △與含糖銀黃顆粒組比較P＜0.05 從表9可知銀黃顆粒對二甲苯所致小鼠耳腫脹有非常顯著的抑制作用。且無糖型優(yōu)于含糖型顆粒療效。(含糖銀黃顆粒為實(shí)施例16的方法制備) 2、銀黃顆粒對大鼠蛋清性足跖腫脹的影響 試驗(yàn)方法大鼠30只，體重180～200g，雌雄各半，按體重隨機(jī)分為3組，即無糖型及含糖型組和空白對照組。用毛細(xì)管放大法測量各組大鼠右后踝關(guān)節(jié)下相同位置的足跖體積。用藥組灌胃給藥3d，末次給藥后60min，在各組動物右后足跖皮下注射100％新鮮蛋清0.05mL，從末次給藥時計(jì)時，每隔2h測致炎后的大鼠足跖體積，致炎前后足跖體積差為腫脹率，結(jié)果見表10。
表10含糖及無糖銀黃顆粒對蛋清性大鼠足跖腫脹的影響對比試驗(yàn)
＊＊與空白對照組比較P＜0.01 △與含糖銀黃顆粒組比較P＜0.05 從表10可知銀黃顆粒對蛋清性大鼠足跖腫脹有非常顯著的抑制作用。且無糖型優(yōu)于含糖型顆粒療效。
實(shí)驗(yàn)例5綠原酸含量測定方法實(shí)驗(yàn) 銀黃顆粒由金銀花提取物和黃芩提取物組方而成，可清熱，解毒，消炎。用于急慢性扁桃體炎，急慢性咽喉炎，上呼吸道感染。方中金銀花為君藥，具有清熱解毒，疏散風(fēng)熱的功效。金銀花中綠原酸可抗炎、抗病毒，為中金銀花有效成分。所以選擇測定綠原酸含量作為控制銀黃顆粒質(zhì)量的方法。
1、綠原酸的性質(zhì) 綠原酸(Chlorogenic acid)是由咖啡酸(Caffeic acid)與奎尼酸(Quinic acid)生成的苯丙素類化合物，異名咖啡鞣酸，系統(tǒng)名1，3，4，5-四羥基環(huán)己烷羧酸-(3，4-二羥基肉桂酸酯)。分子結(jié)構(gòu)中有酯鍵、不飽和雙鍵及多元酚三個不穩(wěn)定部分，因此易溶于乙醇、丙酮、甲醇等極性溶劑，微溶于乙酸乙酯，難溶于三氯甲烷、乙醚、苯等親脂性有機(jī)溶劑，通常利用乙醇、丙酮、甲醇等溶劑在低溫條件下將其從植物中提取出來，且應(yīng)避免高溫和長時間加熱。
2、測定方法的選擇 有關(guān)金銀花中綠原酸含量測定方法文獻(xiàn)報道有比色法、紫外分光光度法、薄層掃描法、紙色譜-紫外分光光度法、薄層色譜-紫外分光光度法、毛細(xì)管區(qū)帶電泳法、導(dǎo)數(shù)光譜法、高效液相色譜法等，為了減少不同試驗(yàn)過程造成的誤差，選擇高效液相色譜法測定綠原酸含量，高效液相色譜法具有快速簡便、靈敏準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好等特點(diǎn)。
3、檢測波長的選擇 將綠原酸對照品溶液利用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行全波長掃面，得到綠原酸的紫外全波長掃描圖見附圖2 試驗(yàn)結(jié)果表明綠原酸最大吸收峰為327、246、220。通過選用三個不同檢測波長檢測銀黃顆粒中的綠原酸優(yōu)選檢測波長327nm雜質(zhì)較少，吸收背景小，綠原酸的得到較好分離，峰對稱性好，峰面積較246、220nm最大，靈敏度高，檢測時誤差小，能夠滿足質(zhì)量控制的要求；246、220nm下雜質(zhì)較多，綠原酸較難分離，定量準(zhǔn)確度下降。所以選擇327nm作為檢測波長。
4、流動相的優(yōu)選 本試驗(yàn)曾以甲醇-1.15％冰醋酸(11∶89)、甲醇-乙腈-水(10∶2.5∶87)、乙腈-0.4％磷酸溶液(13∶87)等系統(tǒng)作為流動相作了系列比較。結(jié)果表明，利用綠原酸為含羧基和鄰二酚羥基的強(qiáng)極性有機(jī)酸的性質(zhì)，調(diào)節(jié)乙腈與0.4％磷酸溶液的比例，排除其他成分的干擾，使綠原酸保留時間和峰形都適宜，最后選定乙腈-0.4％磷酸溶液(10∶90)為流動相，對本品分離效果好，峰形對稱，雜質(zhì)峰達(dá)到基線分離，陰性無干擾。見附圖3。
5、銀黃顆粒中綠原酸提取條件的考察 5.1提取溶劑的選擇 選擇乙醇、甲醇、20％甲醇、50％甲醇、80％甲醇為提取溶劑提取銀黃顆粒中綠原酸。
取銀黃顆粒約1.0g五份，研細(xì)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入乙醇、甲醇、20％甲醇、50％甲醇、80％甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用相應(yīng)提取溶劑補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色容量瓶中，加相應(yīng)提取溶劑至刻度，搖勻，即得。精密吸取上述5個供試品溶液10μL注入液相色譜儀，結(jié)果如表11及附圖4 表11不同提取溶劑提取綠原酸提取率的比較
通過選用不同溶劑提取綠原酸，試驗(yàn)結(jié)果表明50％甲醇較其他溶劑提取率最高，20％甲醇提取水溶性雜質(zhì)較多，由于本劑型為顆粒劑，甲醇及乙醇浸潤性不好，較難滲入顆粒內(nèi)部造成提取率不高。所以最終選擇50％甲醇進(jìn)行提取。
5.2提取方法的選擇 由于綠原酸對熱不穩(wěn)定，故比較不同提取方法選擇合適的提取方法 方法一回流 取銀黃顆粒約1.0g，研細(xì)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入50％甲醇50ml，稱定重量，回流處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色容量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得。
方法二超聲 取銀黃顆粒約1.0g，研細(xì)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入50％甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色容量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得。
方法三冷浸 取銀黃顆粒約1.0g，研細(xì)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入50％甲醇50ml，稱定重量，冷浸過夜，再稱定重量，用50％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色容量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得。
精密吸取上述3個供試品溶液10μL注入液相色譜儀，結(jié)果如表12及附圖5 表12不同方法提取綠原酸提取率的比較
通過三種不同提取方法的比較發(fā)現(xiàn)超聲法提取綠原酸的效率最高。究其原因是因?yàn)榛亓鳒囟容^高，造成綠原酸的分解；冷浸法雖然提取溫度低，但是耗時長、提取效率低。
5.3提取溶劑量影響 溶劑量是影響提取效率的一個很重要的影響因素，溶劑量越大，提取效率越高，但是溶劑量增加到一定量以后，提取效率增加不大。所以對提取的溶劑量加以考察 取銀黃顆粒約1.0g三份，研細(xì)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入50％甲醇25、50、100ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，分別精密量取續(xù)濾液2.5、5、10ml，置25ml棕色容量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得。
精密吸取上述3個供試品溶液10μL注入液相色譜儀，結(jié)果如表13及附圖6 表13不同溶劑量提取綠原酸提取率的比較
5.4提取時間影響 提取時間對提取效率影響較大，提取時間短，提取效率不高，延長提取時間可以增加提取效率，但過長時間的提取耗時，而且對提高提取效率增加作用不大。所以對提取的溶劑量加以考察 取銀黃顆粒約1.0g三份，研細(xì)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入50％甲醇50mL，稱定重量，超聲處理15、30、45分鐘，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，分別精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色容量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得。
精密吸取上述3個供試品溶液10μl注入液相色譜儀，結(jié)果如表14及附圖7 表14不同提取時間提取綠原酸提取率的比較
由試驗(yàn)結(jié)果可以看出，30min提取效率最高，15min提取時間較短所以提取不完全，而45min提取時間較長，可能造成綠原酸分解。所以選擇30min為提取時間。
5.5樣品保存條件的選擇 綠原酸的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)造成其性質(zhì)不穩(wěn)定，在光照條件下容易造成分解，含量下降。所以對其保存條件進(jìn)行摸索。
5.5.1比較透明容量瓶和棕色容量瓶對保存樣品溶液穩(wěn)定性的影響。
精密稱取綠原酸對照品適量兩份，分別于透明容量瓶和棕色容量瓶中加50％甲醇配制成每1ml含20μg的溶液在常溫下放置，于0、2、4、6、8h精密吸取10μL注入液相色譜儀，結(jié)果如下表15及附圖8 表15透明容量瓶和棕色容量瓶對保存樣品溶液穩(wěn)定性的比較
由試驗(yàn)結(jié)果可以看出，樣品保存在棕色瓶中穩(wěn)定性較透明容量瓶中穩(wěn)定性好，所以選擇重色容量瓶保存樣品溶液。
5.5.2保存溫度對樣品穩(wěn)定性影響 溫度對綠原酸穩(wěn)定性有很大影響。分別考察25℃與4℃下綠原酸的穩(wěn)定性。
精密稱取綠原酸對照品適量，分別于棕色容量瓶中加50％甲醇配制兩份成每1ml含20μg的溶液分別放置于25℃與4℃下，于0、4、8、12、24、36、48、96小時精密吸取10μL注入液相色譜儀，結(jié)果如下表16及附圖9 表16保存溫度對樣品穩(wěn)定性影響
樣品保存在4℃及25℃條件下24小時內(nèi)綠原酸峰面積RSD均小于5％，而25℃保存條件下96小時內(nèi)綠原酸峰面積RSD為6.2％，4℃保存條件下96小時內(nèi)綠原酸峰面積RSD為1.8％。試驗(yàn)結(jié)果表明綠原酸在4℃下保存更穩(wěn)定，保存時間更長。所以對照品應(yīng)保存在4℃環(huán)境中。
綜上試驗(yàn)最后確定銀黃顆粒中綠原酸含量測定的色譜條件及對照品和供試品制備方法為 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.4％磷酸溶液(10∶90)為流動相；檢測波長為327nm；理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。
對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品適量，加50％甲醇制成每1ml含20μg的溶液，作為對照品溶液。(10℃以下保存) 供試品溶液的制備取本品約1.0g，研細(xì)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加50％甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色容量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得。
實(shí)驗(yàn)例6綠原酸含量測定方法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 檢測儀器島津公司SPD-10ATvp型高效液相色譜儀 進(jìn)樣器自動進(jìn)樣器 色譜柱安捷倫(C18 4.6×150mm，5μm) 流動相乙腈-0.4％磷酸溶液(10∶90)(乙腈色譜級，磷酸分析級) 流速1.0ml/min 檢測波長327nm 柱溫室溫 對照品來源綠原酸購于中國藥品生物制品檢定所批號110753-200413 對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品5mg，置50ml量瓶中，加50％甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得，每1ml含綠原酸20μg的對照品溶液。(10℃以下保存) 樣品批號07110501、07110902、07111303 供試品溶液的制備取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研細(xì)，取約1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加50％甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色容量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得。
金銀花空白溶液的制備 按銀黃顆粒制備工藝制備缺金銀花的空白樣品，并按供試品溶液的制備方法制備陰性對照液。
測定方法分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照液各10μl，注入液相色譜儀，測定。
試驗(yàn)結(jié)果表明，對照品和供試品峰形良好，供試品分離良好。在對照品和供試品對應(yīng)出峰處，陰性無干擾。
1.方法學(xué)實(shí)驗(yàn) 1.1線性關(guān)系考察 精密稱取綠原酸對照品5.40mg，置50ml量瓶中，加50％甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每1ml含綠原酸21.6μg的對照品溶液。取對照品溶液(21.6μg/ml)搖勻，分別精密吸取2、4、8、12、16、20μl注入高效液相色譜儀，測定峰面積，結(jié)果見下表，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，表明綠原酸在0.0432μg～0.432μg間呈線性關(guān)系，其回歸方程為Area＝3.789E+06x-1.399E+04(r＝0.9999)，數(shù)據(jù)見表17和附圖10。
表17綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線
1.2穩(wěn)定性試驗(yàn) 制備供試品溶液，分別于配制后0、2、4、6、12、24小時，依法測定，進(jìn)樣體積10μl，結(jié)果表明，其在24小時內(nèi)基本穩(wěn)定，結(jié)果見表18。
表18穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
1.3精密度試驗(yàn) 精密吸取對照品溶液10μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，求得相對標(biāo)準(zhǔn)偏差＜2％，結(jié)果見表19。
表19精密度實(shí)驗(yàn)
1.4重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批號(批號07110501)樣品5份，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液5份，對每份進(jìn)行測定，求得相對標(biāo)準(zhǔn)偏差＜2％，結(jié)果見表20。
表20重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)
1.5回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的同一批號(批號07110501)的樣品0.5g五份，分別置具塞錐形瓶中，精密加入綠原酸對照品溶液5.0mL，濃度為0.654mg/mL(精密稱取綠原酸對照品32.70mg，置50mL容量瓶中，加50％甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得)，按供試品溶液的制備方法操作，測定其含量，并計(jì)算其回收率，測定結(jié)果見下表21。
表21回收率實(shí)驗(yàn)
2.含量測定 對三批樣品進(jìn)行了含量測定，試驗(yàn)結(jié)果見下表22 表22樣品的含量測定
根據(jù)以上數(shù)據(jù)，將含量限度定為本品每袋含金銀花提取物按綠原酸(C16H18O9)計(jì)，不得少于11.6mg。
實(shí)驗(yàn)例7微生物限定檢查方法實(shí)驗(yàn) 1.供試品銀黃顆粒(無蔗糖) 2.菌種 菌落計(jì)數(shù)用菌種枯草芽孢桿菌[CMCC(B)63501]、金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、大腸桿菌[CMCC(B)44102]、白色念珠菌[CMCC(F)98001]、黑曲霉[CMCC(F)98003]。
控制菌檢查用菌種大腸桿菌[CMCC(B)44102]、金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]。
3.培養(yǎng)基營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、改良馬丁培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、膽鹽乳糖培養(yǎng)基、4-甲基傘形酮葡糖苷酸培養(yǎng)基(MUG)。
4.預(yù)試驗(yàn)按照中國藥典2005年版微生物限度檢查法中常規(guī)法檢驗(yàn)，本品有抑菌作用。霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)檢查可用常規(guī)法。經(jīng)進(jìn)一步試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用離心加稀釋法基本可適用于細(xì)菌和控制菌的檢查計(jì)數(shù)。
微生物限度檢查方法草案取供試品10g，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，振搖，使呈1∶10的供試品儲備液；取1∶10的供試品儲備液10ml，500轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，取上清液加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液補(bǔ)至10ml，3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，取底部集菌液約2ml，加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液補(bǔ)至10ml，即為1∶10的供試液。細(xì)菌檢查采用離心加稀釋法。取供試液1ml，分別注入5個平皿中，每皿0.2ml，依法檢查(《中國藥典》2005年版一部附錄XIII C)。霉菌和酵母菌檢查按常規(guī)法，依法檢查(《中國藥典》2005年版一部附錄XIII C)。大腸桿菌檢查，依離心加稀釋法檢查(中國藥典2005年版一部附錄XIIIC)。
5.細(xì)菌、霉菌及酵母菌方法學(xué)驗(yàn)證 按照中國藥典2005年版微生物限度檢查法進(jìn)行細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)的方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)及菌落計(jì)數(shù)。
5.1菌液制備 (1)接種金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至10ml營養(yǎng)肉湯中，35～37℃培養(yǎng)18～24小時，取此培養(yǎng)液1ml加0.9％無菌氯化鈉溶液9ml，采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-5～10-7，使菌數(shù)約為50～100cfu/ml。
(2)接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至10ml改良馬丁培養(yǎng)基中，23～28℃培養(yǎng)24～48小時，取此培養(yǎng)液1ml加0.9％無菌氯化鈉溶液9ml，采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-5～10-7，使菌數(shù)約為50～100cfu/ml。
(3)接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上，23～28℃培養(yǎng)5～7天，加0.9％無菌氯化鈉溶液3～5ml洗下霉菌孢子，吸出菌液，取1ml菌液加0.9％無菌氯化鈉溶液9ml，采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-4～10-6，使菌數(shù)約為50～100cfu/ml。
5.2供試液的制備取供試品10g，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，振搖，使呈1∶10的供試品儲備液；取1∶10的供試品儲備液10ml，500轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，取上清液加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液補(bǔ)至10ml，3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，取底部集菌液約2ml，加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液補(bǔ)至10ml，即為1∶10的供試液。
5.3驗(yàn)證方法 (1)菌液組采用平皿計(jì)數(shù)法，取菌液分別注入2個平皿中，每皿1ml，測定上述制備好的菌液中每毫升的活菌數(shù)，測定結(jié)果見表23。
(2)供試品對照組取供試液1ml，分別注入5個平皿中，每皿0.2ml，測定供試品本底的細(xì)菌數(shù)，測定結(jié)果見表2。霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)取1∶10的供試品儲備液1ml，注入平皿中，測定供試液本底的霉菌和酵母菌數(shù)，測定結(jié)果見表24。
(3)試驗(yàn)組細(xì)菌計(jì)數(shù)取供試液0.2ml和1ml上述菌液(50～100cfu試驗(yàn)菌)，分別注入平皿中，立即傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，待凝固后，置規(guī)定溫度培養(yǎng)2天觀察結(jié)果，測定結(jié)果見表19，回收率見表4。霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)取1∶10的供試品儲備液1ml和1ml上述菌液(50～100cfu試驗(yàn)菌)，分別注入平皿中，立即傾注玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，待凝固后，置規(guī)定溫度培養(yǎng)3天觀察結(jié)果，測定結(jié)果見表25。計(jì)算回收率見表26。
(4)稀釋劑對照組分別取10ml上述細(xì)菌菌液(500～1000cfu試驗(yàn)菌)，500轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，取上清液加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至10ml，3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，取底部集菌液約2ml，加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至10ml，制備稀釋劑對照液。取稀釋劑對照液1ml，注入平皿中，立即傾注培養(yǎng)基，待凝固后，置規(guī)定溫度培養(yǎng)2～5天觀察結(jié)果，測定結(jié)果見表27，28.霉菌和酵母菌數(shù)檢查未采用特殊的方法處理，故空白對照組可不進(jìn)行驗(yàn)證。
5.4測定結(jié)果 表23菌液組菌落計(jì)數(shù)(cfu)
表24供試品對照組菌落計(jì)數(shù)(cfu)
表25試驗(yàn)組菌落計(jì)數(shù)(cfu)
表26試驗(yàn)組回收率測定結(jié)果
表27空白對照組菌落計(jì)數(shù)(cfu)
表28空白對照組回收率測定結(jié)果
經(jīng)上述實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，采用離心加稀釋法進(jìn)行細(xì)菌檢查可消除本品的抑菌作用，采用常規(guī)法進(jìn)行本品霉菌和酵母菌檢查，方法可行。
6.控制菌檢查 按照中國藥典2005年版微生物限度檢查法進(jìn)行控制菌的方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)及檢查。
6.1.菌液制備 接種大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的新鮮培養(yǎng)物至10ml營養(yǎng)肉湯中，35～37℃培養(yǎng)18～24小時，取此培養(yǎng)液1ml加0.9％無菌氯化鈉溶液9ml，采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-5～10-7，使細(xì)菌數(shù)約為10～100cfu/ml。
6.2.供試液的制備 同5.2.項(xiàng)下方法制備供試液。
6.3.驗(yàn)證方法及檢查 (1)試驗(yàn)組 取供試品液10ml，加至膽鹽乳糖培養(yǎng)基100ml中，加入大腸桿菌10～100cfu，35～37℃培養(yǎng)18～24小時，取上述培養(yǎng)物0.2ml，加入含5ml的4-甲基傘形酮葡糖苷酸培養(yǎng)基(MUG)試管中，置35～37℃培養(yǎng)5～24小時，觀察結(jié)果，見表23。
(2)陰性菌對照組 采用革蘭氏陽性球菌金黃色葡萄球菌驗(yàn)證方法的專屬性。取供試品液10ml，加至膽鹽乳糖培養(yǎng)基100ml中，加入金黃色葡萄球菌10～100cfu作陰性菌對照，35～37℃培養(yǎng)18～24小時，取上述培養(yǎng)物0.2ml，加入含5ml的4-甲基傘形酮葡糖苷酸培養(yǎng)基(MUG)試管中，置35～37℃培養(yǎng)5～24小時，觀察結(jié)果，見表23。
(3)供試品 取供試品液10ml，加至膽鹽乳糖培養(yǎng)基100ml中，作為供試品。35～37℃培養(yǎng)18～24小時，取上述培養(yǎng)物0.2ml，加入含5ml的4-甲基傘形酮葡糖苷酸培養(yǎng)基(MUG)試管中，置35～37℃培養(yǎng)5～24小時，觀察結(jié)果，見表23。
(4)陽性對照 取膽鹽乳糖培養(yǎng)基100ml，加入大腸桿菌10～100cfu，35～37℃培養(yǎng)18～24小時，取上述培養(yǎng)物0.2ml，加入含5ml的4-甲基傘形酮葡糖苷酸培養(yǎng)基(MUG)試管中，置35～37℃培養(yǎng)5～24小時，觀察結(jié)果，見表23。
(5)陰性對照 另取與供試品液等量的稀釋劑加至膽鹽乳糖培養(yǎng)基100ml中作稀釋劑陰性對照，35～37℃培養(yǎng)18～24小時，取上述培養(yǎng)物0.2ml，加入含5ml的4-甲基傘形酮葡糖苷酸培養(yǎng)基(MUG)試管中，置35～37℃培養(yǎng)5～24小時，觀察結(jié)果，見表29。
表29控制菌驗(yàn)證及檢查結(jié)果
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組控制菌生長良好，本品對大腸桿菌沒有抑菌作用。陰性菌均未檢出，表明該控制菌檢查方法的專屬性好。陽性對照試驗(yàn)檢出相應(yīng)控制菌，陰性對照無菌生長，可采用離心加稀釋法進(jìn)行本品的大腸桿菌檢查。
7.結(jié)論 根據(jù)上述驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果，制定本品的微生物限度檢查法標(biāo)準(zhǔn)如下 微生物限度取供試品10g，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，振搖，使呈1∶10的供試品儲備液，取1∶10的供試品儲備液10ml，500轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，取上清液加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液補(bǔ)至10ml，3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，取底部集菌液約2ml，加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液補(bǔ)至10ml，即為1∶10的供試液。細(xì)菌計(jì)數(shù)采用培養(yǎng)基稀釋法，取1∶10的供試液1ml，分別注入5個平皿中，每皿0.2ml，依法檢查(中國藥典2005年版一部附錄XIIIC)。霉菌、酵母菌檢查取1∶10的供試品儲備液，依常規(guī)法檢查(中國藥典2005年版一部附錄XIIIC)。大腸桿菌檢查取1∶10的供試品液，依離心加稀釋法檢查(中國藥典2005年版一部附錄XIIIC)。1g供試品中，細(xì)菌數(shù)不得過1000個，霉菌和酵母菌數(shù)不得過100個，大腸桿菌不得檢出。
按照該方法檢驗(yàn)供試品符合規(guī)定，測定結(jié)果見表30。
表24供試品檢驗(yàn)結(jié)果
實(shí)驗(yàn)例8黃芩苷含量測定方法實(shí)驗(yàn) 檢測儀器島津公司SPD-10ATvp型高效液相色譜儀 色譜柱安捷倫(C18 4.6×250mm，5μm) 流動相甲醇-2％醋酸溶液(55∶45) 流速1.0ml/min 進(jìn)樣量10μl 檢測波長280nm 對照品來源黃芩苷購于中國藥品生物制品檢定所 樣品批號07110501、07110902、07111303 供試品溶液制備方法取本品約1.0g，研細(xì)，精密稱定，置100ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，超聲(功率250W，頻率50Hz)處理30分鐘，放冷，用70％乙醇補(bǔ)足減失的量，搖勻，濾過，即得。
陰性對照樣品溶液的制備按銀黃顆粒制備工藝制備缺黃芩的空白樣品，并按供試品溶液的制備方法制備成陰性樣品液。
1.色譜條件的建立 本品通過實(shí)驗(yàn)摸索建立了本品的流動相色譜條件，以甲醇為有機(jī)相，2％醋酸溶液為水相，并調(diào)整合適的比例，經(jīng)過試驗(yàn)確定了本品的色譜條件 流動相甲醇-2％醋酸溶液(55∶45) 波長280nm 通過陰性干擾試驗(yàn)證明，本品的陰性不干擾黃芩苷主成分色譜峰，且黃芩苷主成分色譜峰與其他色譜峰分離度良好，可滿足含量測定的要求。
2.含量測定方法的建立 2.1線性試驗(yàn)范圍 精密稱取黃芩苷對照品5.02mg，加70％乙醇制成濃度為50.2μg的對照品溶液。分別吸取上述對照品溶液2、4、8、10、12、20μl，進(jìn)樣，測定峰面積，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程，結(jié)果見表31。
表31黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)曲線測定數(shù)據(jù)
結(jié)論由試驗(yàn)結(jié)果可知黃芩苷對照品的進(jìn)樣量在0.1004μg～1.004μg的范圍之內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，其線性方程為Y＝1E+0.6x-866.7；r＝0.9999。
2.2精密度試驗(yàn) 精密吸取對照品溶液10μl，在相同色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣5次，測定色譜峰的面積，求得相對標(biāo)準(zhǔn)偏差＜2％，結(jié)果見表32。
表32精密度試驗(yàn)數(shù)據(jù)(n＝5)

結(jié)論結(jié)果本品的精密度RSD為0.79％，該測定方法精密度良好，符合相關(guān)測定的要求。
2.3穩(wěn)定性試驗(yàn) 制備供試品溶液，分別于配制后0、2、4、6、12、24小時，依法測定，進(jìn)樣體積10μl，結(jié)果表明，其在24小時內(nèi)基本穩(wěn)定，結(jié)果見表33。
表33供試品穩(wěn)定性試驗(yàn)數(shù)據(jù)(n＝6)
結(jié)論由數(shù)據(jù)結(jié)果可以看出本品在24小時內(nèi)基本穩(wěn)定，其RSD％結(jié)果小于2.0％。
2.4重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批號(批號07110501)樣品5份，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液5份，對每份進(jìn)行測定，求得相對標(biāo)準(zhǔn)偏差＜2％，結(jié)果見表34. 表34重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果
結(jié)論由實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果可知，本品的重復(fù)性含量測定結(jié)果較好， 2.5回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的同一批號(批號07110501)的樣品0.5g五份，精密稱定，置100ml量瓶中，再精密量取黃芩苷對照品母溶液(0.442mg/m1)5ml，同置100ml量瓶中，加入70％乙醇定容至刻度，超聲處理(功率250W，頻率50Hz)30分鐘，放冷，以70％乙醇補(bǔ)足減失量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。分別制備5份樣品溶液，測定其回收率結(jié)果，測定結(jié)果表35。
表35回收率試驗(yàn)結(jié)果
結(jié)論本品的回收率試驗(yàn)結(jié)果符合含量測定的要求。
3.含量測定結(jié)果 本品三批樣品的含量測定結(jié)果見表36。
表36三批樣品的黃芩苷含量測定結(jié)果
根據(jù)以上數(shù)據(jù)，將含量限度定為本品每袋含黃芩苷提取物按黃芩苷(C21H18O11)計(jì)，不得少于6.5mg。
下述實(shí)施例均能實(shí)現(xiàn)上述實(shí)驗(yàn)例的效果。

具體實(shí)施例方式 實(shí)施例1無糖型顆粒劑 金銀花提取物30g、黃芩提取物12g、糊精126.8g、甜菊素1.18g 取金銀花，加水煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮2小時，第二次加水6倍量煎煮2小時，合并煎液，濾過，濾液加入石灰乳調(diào)節(jié)pH值至10～12，靜置，濾取沉淀，加水適量，用硫酸調(diào)節(jié)pH值至6～7，攪勻，濾過，濾液濃縮至稠膏狀，即得金銀花提取物；取黃芩，加至沸水中煎煮2次，每次1小時，合并煎煮液，濾過，濾液加硫酸調(diào)節(jié)pH值至2，靜置，濾取沉淀，用乙醇適量洗滌后，干燥，即得黃芩提取物；將金銀花提取物、黃芩提取物、糊精、甜菊素按上述比例混合，攪拌均勻，制成顆粒，60℃以下干燥，制成1000g，即得無糖型顆粒劑。
實(shí)施例2散劑 金銀花提取物20g、黃芩提取物25g、糊精65g、甜菊素1.8g 取金銀花，加水煎煮3次，第一次加水6倍量煎煮3小時，第二次加水4倍量煎煮3小時，合并煎液，濾過，濾液加入石灰乳調(diào)節(jié)pH值至11，靜置，濾取沉淀，加水適量，用硫酸調(diào)節(jié)pH值至6.5，攪勻，濾過，濾液濃縮至稠膏狀，即得金銀花提取物；取黃芩，加至沸水中煎煮1次，每次1.5小時，合并煎煮液，濾過，濾液加硫酸調(diào)節(jié)pH值至1，靜置，濾取沉淀，用乙醇適量洗滌后，干燥，即得黃芩提取物；將金銀花提取物、黃芩提取物、糊精、甜菊素按比例混合，攪拌均勻，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成臨床或制藥上接受的散劑。
實(shí)施例3膠囊劑 金銀花提取物30g、黃芩提取物12g、糊精126.8g、甜菊素1.18g 加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成臨床或制藥上接受的膠囊劑。
實(shí)施例4無糖型顆粒劑 金銀花提取物30g、黃芩提取物12g、糊精126.8g、甜菊素1.18g 取金銀花，加水煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮2小時，第二次加水6倍量煎煮2小時，合并煎液，濾過，濾液加入石灰乳調(diào)節(jié)pH值至10～12，靜置，濾取沉淀，加水適量，用硫酸調(diào)節(jié)pH值至6～7，攪勻，濾過，濾液濃縮至稠膏狀，即得金銀花提取物；取黃芩，加至沸水中煎煮2次，每次1小時，合并煎煮液，濾過，濾液加硫酸調(diào)節(jié)pH值至2，靜置，濾取沉淀，用乙醇適量洗滌后，干燥，即得黃芩提取物；將金銀花提取物、黃芩提取物、糊精、甜菊素按上述比例混合，攪拌均勻，制成顆粒，60℃以下干燥，制成1000g，即得無糖型顆粒劑； 含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以10∶90比例的乙腈-0.4％磷酸溶液為流動相；檢測波長為327nm；理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品適量，加50％甲醇制成每1ml含20μg的溶液，作為對照品溶液，10℃以下保存；供試品溶液的制備取中藥組合物無糖型顆粒劑1.0g，研細(xì)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加50％甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色容量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；中藥組合物無糖型顆粒劑每袋含金銀花提取物按綠原酸C16H18O9計(jì)，不得少于6.0mg。
實(shí)施例5無糖型顆粒劑 金銀花提取物30g、黃芩提取物12g、糊精126.8g、甜菊素1.18g 取金銀花，加水煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮2小時，第二次加水6倍量煎煮2小時，合并煎液，濾過，濾液加入石灰乳調(diào)節(jié)pH值至10～12，靜置，濾取沉淀，加水適量，用硫酸調(diào)節(jié)pH值至6～7，攪勻，濾過，濾液濃縮至稠膏狀，即得金銀花提取物；取黃芩，加至沸水中煎煮2次，每次1小時，合并煎煮液，濾過，濾液加硫酸調(diào)節(jié)pH值至2，靜置，濾取沉淀，用乙醇適量洗滌后，干燥，即得黃芩提取物；將金銀花提取物、黃芩提取物、糊精、甜菊素按上述比例混合，攪拌均勻，制成顆粒，60℃以下干燥，制成1000g，即得無糖型顆粒劑； 含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以55∶45比例的甲醇-2％醋酸溶液為流動相；檢測波長為280nm；理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取黃芩苷對照品適量，加70％乙醇制成每1ml含50μg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備取中藥組合物無糖型顆粒劑1.0g，研細(xì)，精密稱定，置100ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，功率250W，頻率50Hz條件下超聲處理30分鐘，放冷，用70％乙醇補(bǔ)足減失的量，搖勻，濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；中藥組合物無糖型顆粒劑每袋含黃芩提取物按黃芩苷C21H18O11計(jì)，不得少于6.5mg。
實(shí)施例6無糖型顆粒劑 金銀花提取物30g、黃芩提取物12g、糊精126.8g、甜菊素1.18g 取金銀花，加水煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮2小時，第二次加水6倍量煎煮2小時，合并煎液，濾過，濾液加入石灰乳調(diào)節(jié)pH值至10～12，靜置，濾取沉淀，加水適量，用硫酸調(diào)節(jié)pH值至6～7，攪勻，濾過，濾液濃縮至稠膏狀，即得金銀花提取物；取黃芩，加至沸水中煎煮2次，每次1小時，合并煎煮液，濾過，濾液加硫酸調(diào)節(jié)pH值至2，靜置，濾取沉淀，用乙醇適量洗滌后，干燥，即得黃芩提取物；將金銀花提取物、黃芩提取物、糊精、甜菊素按上述比例混合，攪拌均勻，制成顆粒，60℃以下干燥，制成1000g，即得無糖型顆粒劑； 微生物限度檢查取供試品10g，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，振搖，使呈1∶10的供試品儲備液，取1∶10的供試品儲備液10ml，500轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，取上清液加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液補(bǔ)至10ml，3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，取底部集菌液2ml，加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液補(bǔ)至10ml，即為1∶10的供試液；細(xì)菌檢查采用離心加稀釋法，取1∶10的供試液1ml，分別注入5個平皿中，每皿0.2ml，依中國藥典2005年版一部附錄XIIIC法檢查，霉菌、酵母菌檢查取1∶10的供試品儲備液，依常規(guī)中國藥典2005年版一部附錄XIIIC法檢查；大腸埃希菌檢查取1∶10的供試品液，依中國藥典2005年版一部附錄XIIIC離心加稀釋法檢查；1g供試品中，細(xì)菌數(shù)不得過1000個，霉菌和酵母菌數(shù)不得過100個，大腸埃希菌不得檢出。
實(shí)施例7無糖型顆粒劑 金銀花提取物30g、黃芩提取物12g、糊精126.8g、甜菊素1.18g 取金銀花，加水煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮2小時，第二次加水6倍量煎煮2小時，合并煎液，濾過，濾液加入石灰乳調(diào)節(jié)pH值至10～12，靜置，濾取沉淀，加水適量，用硫酸調(diào)節(jié)pH值至6～7，攪勻，濾過，濾液濃縮至稠膏狀，即得金銀花提取物；取黃芩，加至沸水中煎煮2次，每次1小時，合并煎煮液，濾過，濾液加硫酸調(diào)節(jié)pH值至2，靜置，濾取沉淀，用乙醇適量洗滌后，干燥，即得黃芩提取物；將金銀花提取物、黃芩提取物、糊精、甜菊素按上述比例混合，攪拌均勻，制成顆粒，60℃以下干燥，制成1000g，即得無糖型顆粒劑； 含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以10∶90比例的乙腈-0.4％磷酸溶液為流動相；檢測波長為327nm；理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品適量，加50％甲醇制成每1ml含20μg的溶液，作為對照品溶液，10℃以下保存；供試品溶液的制備取中藥組合物無糖型顆粒劑1.0g，研細(xì)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加50％甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色容量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；中藥組合物無糖型顆粒劑每袋含金銀花提取物按綠原酸C16H18O9計(jì)，不得少于6.0mg； 含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以55∶45比例的甲醇-2％醋酸溶液為流動相；檢測波長為280nm；理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取黃芩苷對照品適量，加70％乙醇制成每1ml含50μg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備取中藥組合物無糖型顆粒劑1.0g，研細(xì)，精密稱定，置100ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，功率250W，頻率50Hz條件下超聲處理30分鐘，放冷，用70％乙醇補(bǔ)足減失的量，搖勻，濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；中藥組合物無糖型顆粒劑每袋含黃芩提取物按黃芩苷C21H18O11計(jì)，不得少于6.5mg。
實(shí)施例8無糖型顆粒劑 金銀花提取物30g、黃芩提取物12g、糊精126.8g、甜菊素1.18g 取金銀花，加水煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮2小時，第二次加水6倍量煎煮2小時，合并煎液，濾過，濾液加入石灰乳調(diào)節(jié)pH值至10～12，靜置，濾取沉淀，加水適量，用硫酸調(diào)節(jié)pH值至6～7，攪勻，濾過，濾液濃縮至稠膏狀，即得金銀花提取物；取黃芩，加至沸水中煎煮2次，每次1小時，合并煎煮液，濾過，濾液加硫酸調(diào)節(jié)pH值至2，靜置，濾取沉淀，用乙醇適量洗滌后，干燥，即得黃芩提取物；將金銀花提取物、黃芩提取物、糊精、甜菊素按上述比例混合，攪拌均勻，制成顆粒，60℃以下干燥，制成1000g，即得無糖型顆粒劑； 含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以10∶90比例的乙腈-0.4％磷酸溶液為流動相；檢測波長為327nm；理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品適量，加50％甲醇制成每1ml含20μg的溶液，作為對照品溶液，10℃以下保存；供試品溶液的制備取中藥組合物無糖型顆粒劑1.0g，研細(xì)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加50％甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色容量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；中藥組合物無糖型顆粒劑每袋含金銀花提取物按綠原酸C16H18O9計(jì)，不得少于6.0mg； 微生物限度檢查取供試品10g，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，振搖，使呈1∶10的供試品儲備液，取1∶10的供試品儲備液10ml，500轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，取上清液加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液補(bǔ)至10ml，3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，取底部集菌液2ml，加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液補(bǔ)至10ml，即為1∶10的供試液；細(xì)菌檢查采用離心加稀釋法，取1∶10的供試液1ml，分別注入5個平皿中，每皿0.2ml，依中國藥典2005年版一部附錄XIIIC法檢查，霉菌、酵母菌檢查取1∶10的供試品儲備液，依常規(guī)中國藥典2005年版一部附錄XIIIC法檢查；大腸埃希菌檢查取1∶10的供試品液，依中國藥典2005年版一部附錄XIIIC離心加稀釋法檢查；1g供試品中，細(xì)菌數(shù)不得過1000個，霉菌和酵母菌數(shù)不得過100個，大腸埃希菌不得檢出。
實(shí)施例9無糖型顆粒劑 金銀花提取物30g、黃芩提取物12g、糊精126.8g、甜菊素1.18g 取金銀花，加水煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮2小時，第二次加水6倍量煎煮2小時，合并煎液，濾過，濾液加入石灰乳調(diào)節(jié)pH值至10～12，靜置，濾取沉淀，加水適量，用硫酸調(diào)節(jié)pH值至6～7，攪勻，濾過，濾液濃縮至稠膏狀，即得金銀花提取物；取黃芩，加至沸水中煎煮2次，每次1小時，合并煎煮液，濾過，濾液加硫酸調(diào)節(jié)pH值至2，靜置，濾取沉淀，用乙醇適量洗滌后，干燥，即得黃芩提取物；將金銀花提取物、黃芩提取物、糊精、甜菊素按上述比例混合，攪拌均勻，制成顆粒，60℃以下干燥，制成1000g，即得無糖型顆粒劑； 含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以55∶45比例的甲醇-2％醋酸溶液為流動相；檢測波長為280nm；理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取黃芩苷對照品適量，加70％乙醇制成每1ml含50μg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備取中藥組合物無糖型顆粒劑1.0g，研細(xì)，精密稱定，置100ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，功率250W，頻率50Hz條件下超聲處理30分鐘，放冷，用70％乙醇補(bǔ)足減失的量，搖勻，濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；中藥組合物無糖型顆粒劑每袋含黃芩提取物按黃芩苷C21H18O11計(jì)，不得少于6.5mg； 微生物限度檢查取供試品10g，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，振搖，使呈1∶10的供試品儲備液，取1∶10的供試品儲備液10ml，500轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，取上清液加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液補(bǔ)至10ml，3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，取底部集菌液2ml，加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液補(bǔ)至10ml，即為1∶10的供試液；細(xì)菌檢查采用離心加稀釋法，取1∶10的供試液1ml，分別注入5個平皿中，每皿0.2ml，依中國藥典2005年版一部附錄XIIIC法檢查，霉菌、酵母菌檢查取1∶10的供試品儲備液，依常規(guī)中國藥典2005年版一部附錄XIIIC法檢查；大腸埃希菌檢查取1∶10的供試品液，依中國藥典2005年版一部附錄X IIIC離心加稀釋法檢查；1g供試品中，細(xì)菌數(shù)不得過1000個，霉菌和酵母菌數(shù)不得過100個，大腸埃希菌不得檢出。
實(shí)施例10無糖型顆粒劑 金銀花提取物30g、黃芩提取物12g、糊精126.8g、甜菊素1.18g 取金銀花，加水煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮2小時，第二次加水6倍量煎煮2小時，合并煎液，濾過，濾液加入石灰乳調(diào)節(jié)pH值至10～12，靜置，濾取沉淀，加水適量，用硫酸調(diào)節(jié)pH值至6～7，攪勻，濾過，濾液濃縮至稠膏狀，即得金銀花提取物；取黃芩，加至沸水中煎煮2次，每次1小時，合并煎煮液，濾過，濾液加硫酸調(diào)節(jié)pH值至2，靜置，濾取沉淀，用乙醇適量洗滌后，干燥，即得黃芩提取物；將金銀花提取物、黃芩提取物、糊精、甜菊素按上述比例混合，攪拌均勻，制成顆粒，60℃以下干燥，制成1000g，即得無糖型顆粒劑； 含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以10∶90比例的乙腈-0.4％磷酸溶液為流動相；檢測波長為327nm；理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品適量，加50％甲醇制成每1ml含20μg的溶液，作為對照品溶液，10℃以下保存；供試品溶液的制備取中藥組合物無糖型顆粒劑1.0g，研細(xì)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加50％甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色容量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；中藥組合物無糖型顆粒劑每袋含金銀花提取物按綠原酸C16H18O9計(jì)，不得少于6.0mg； 含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以55∶45比例的甲醇-2％醋酸溶液為流動相；檢測波長為280nm；理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取黃芩苷對照品適量，加70％乙醇制成每1ml含50μg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備取中藥組合物無糖型顆粒劑1.0g，研細(xì)，精密稱定，置100ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，功率250W，頻率50Hz條件下超聲處理30分鐘，放冷，用70％乙醇補(bǔ)足減失的量，搖勻，濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；中藥組合物無糖型顆粒劑每袋含黃芩提取物按黃芩苷C21H18O11計(jì)，不得少于6.5mg； 微生物限度檢查取供試品10g，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，振搖，使呈1∶10的供試品儲備液，取1∶10的供試品儲備液10ml，500轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，取上清液加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液補(bǔ)至10ml，3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，取底部集菌液2ml，加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液補(bǔ)至10ml，即為1∶10的供試液；細(xì)菌檢查采用離心加稀釋法，取1∶10的供試液1ml，分別注入5個平皿中，每皿0.2ml，依中國藥典2005年版一部附錄XIIIC法檢查，霉菌、酵母菌檢查取1∶10的供試品儲備液，依常規(guī)中國藥典2005年版一部附錄XIIIC法檢查；大腸埃希菌檢查取1∶10的供試品液，依中國藥典2005年版一部附錄XIIIC離心加稀釋法檢查；1g供試品中，細(xì)菌數(shù)不得過1000個，霉菌和酵母菌數(shù)不得過100個，大腸埃希菌不得檢出。
實(shí)施例11膠囊劑 金銀花提取物100g、黃芩提取物40g 取金銀花，加水煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮2小時，第二次加水6倍量煎煮2小時，合并煎液，濾過，濾液加入石灰乳調(diào)節(jié)pH值至10～12，靜置，濾取沉淀，加水適量，用硫酸調(diào)節(jié)pH值至6～7，攪勻，濾過，濾液濃縮至稠膏狀，即得金銀花提取物；取黃芩，加至沸水中煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮1小時，第二次加水6倍量煎煮1小時，合并煎煮液，濾過，濾液加硫酸調(diào)節(jié)pH值至2，靜置，濾取沉淀，用乙醇適量洗滌后，干燥，即得黃芩提取物；取金銀花提取物100g、黃芩提取物40g，加淀粉適量，均勻，60℃以下干燥，分裝入膠囊，制成1000g，即得膠囊劑； 含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以10∶90比例的乙腈-0.4％磷酸溶液為流動相；檢測波長為327nm；理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品適量，加50％甲醇制成每1ml含20μg的溶液，作為對照品溶液，10℃以下保存；供試品溶液的制備取中藥組合物膠囊劑1.0g，研細(xì)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加50％甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色容量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
實(shí)施例12膠囊劑 金銀花提取物100g、黃芩提取物40g 取金銀花，加水煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮2小時，第二次加水6倍量煎煮2小時，合并煎液，濾過，濾液加入石灰乳調(diào)節(jié)pH值至10～12，靜置，濾取沉淀，加水適量，用硫酸調(diào)節(jié)pH值至6～7，攪勻，濾過，濾液濃縮至稠膏狀，即得金銀花提取物；取黃芩，加至沸水中煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮1小時，第二次加水6倍量煎煮1小時，合并煎煮液，濾過，濾液加硫酸調(diào)節(jié)pH值至2，靜置，濾取沉淀，用乙醇適量洗滌后，干燥，即得黃芩提取物；取金銀花提取物100g、黃芩提取物40g，加淀粉適量，均勻，60℃以下干燥，分裝入膠囊，制成1000g，即得膠囊劑； 含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以10∶90比例的乙腈-0.4％磷酸溶液為流動相；檢測波長為327nm；理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品適量，加50％甲醇制成每1ml含20μg的溶液，作為對照品溶液，10℃以下保存；供試品溶液的制備取中藥組合物膠囊劑1.0g，研細(xì)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加50％甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色容量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得； 含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以55∶45比例的甲醇-2％醋酸溶液為流動相；檢測波長為280nm；理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取黃芩苷對照品適量，加70％乙醇制成每1ml含50μg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備取中藥組合物膠囊劑1.0g，研細(xì)，精密稱定，置100ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，功率250W，頻率50Hz條件下超聲處理30分鐘，放冷，用70％乙醇補(bǔ)足減失的量，搖勻，濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
實(shí)施例13膠囊劑 金銀花提取物100g、黃芩提取物40g 取金銀花，加水煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮2小時，第二次加水6倍量煎煮2小時，合并煎液，濾過，濾液加入石灰乳調(diào)節(jié)pH值至10～12，靜置，濾取沉淀，加水適量，用硫酸調(diào)節(jié)pH值至6～7，攪勻，濾過，濾液濃縮至稠膏狀，即得金銀花提取物；取黃芩，加至沸水中煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮1小時，第二次加水6倍量煎煮1小時，合并煎煮液，濾過，濾液加硫酸調(diào)節(jié)pH值至2，靜置，濾取沉淀，用乙醇適量洗滌后，干燥，即得黃芩提取物；取金銀花提取物100g、黃芩提取物40g，加淀粉適量，均勻，60℃以下干燥，分裝入膠囊，制成1000g，即得膠囊劑； 含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以10∶90比例的乙腈-0.4％磷酸溶液為流動相；檢測波長為327nm；理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品適量，加50％甲醇制成每1ml含20μg的溶液，作為對照品溶液，10℃以下保存；供試品溶液的制備取中藥組合物膠囊劑1.0g，研細(xì)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加50％甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色容量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得； 含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以55∶45比例的甲醇-2％醋酸溶液為流動相；檢測波長為280nm；理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取黃芩苷對照品適量，加70％乙醇制成每1ml含50μg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備取中藥組合物膠囊劑1.0g，研細(xì)，精密稱定，置100ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，功率250W，頻率50Hz條件下超聲處理30分鐘，放冷，用70％乙醇補(bǔ)足減失的量，搖勻，濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得； 微生物限度檢查取供試品10g，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，振搖，使呈1∶10的供試品儲備液，取1∶10的供試品儲備液10ml，500轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，取上清液加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液補(bǔ)至10ml，3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，取底部集菌液2ml，加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液補(bǔ)至10ml，即為1∶10的供試液；細(xì)菌檢查采用離心加稀釋法，取1∶10的供試液1ml，分別注入5個平皿中，每皿0.2ml，依中國藥典2005年版一部附錄XIIIC法檢查，霉菌、酵母菌檢查取1∶10的供試品儲備液，依常規(guī)中國藥典2005年版一部附錄XIIIC法檢查；大腸埃希菌檢查取1∶10的供試品液，依中國藥典2005年版一部附錄XIIIC離心加稀釋法檢查；1g供試品中，細(xì)菌數(shù)不得過1000個，霉菌和酵母菌數(shù)不得過100個，大腸埃希菌不得檢出。
實(shí)施例14顆粒劑 金銀花提取物100g、黃芩提取物40g 取金銀花，加水煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮2小時，第二次加水6倍量煎煮2小時，合并煎液，濾過，濾液加入石灰乳調(diào)節(jié)pH值至10～12，靜置，濾取沉淀，加水適量，用硫酸調(diào)節(jié)pH值至6～7，攪勻，濾過，濾液濃縮至稠膏狀，即得金銀花提取物；取黃芩，加至沸水中煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮1小時，第二次加水6倍量煎煮1小時，合并煎煮液，濾過，濾液加硫酸調(diào)節(jié)pH值至2，靜置，濾取沉淀，用乙醇適量洗滌后，干燥，即得黃芩提取物；取金銀花提取物100g、黃芩提取物40g，加庶糖粉800g與淀粉適量，攪拌均勻，制成顆粒，60℃以下干燥，制成1000g，即得顆粒劑； 含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以10∶90比例的乙腈-0.4％磷酸溶液為流動相；檢測波長為327nm；理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品適量，加50％甲醇制成每1ml含20μg的溶液，作為對照品溶液，10℃以下保存；供試品溶液的制備取中藥組合物顆粒劑1.0g，研細(xì)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加50％甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色容量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
實(shí)施例15顆粒劑 金銀花提取物100g、黃芩提取物40g 取金銀花，加水煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮2小時，第二次加水6倍量煎煮2小時，合并煎液，濾過，濾液加入石灰乳調(diào)節(jié)pH值至10～12，靜置，濾取沉淀，加水適量，用硫酸調(diào)節(jié)pH值至6～7，攪勻，濾過，濾液濃縮至稠膏狀，即得金銀花提取物；取黃芩，加至沸水中煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮1小時，第二次加水6倍量煎煮1小時，合并煎煮液，濾過，濾液加硫酸調(diào)節(jié)pH值至2，靜置，濾取沉淀，用乙醇適量洗滌后，干燥，即得黃芩提取物；取金銀花提取物100g、黃芩提取物40g，加庶糖粉800g與淀粉適量，攪拌均勻，制成顆粒，60℃以下干燥，制成1000g，即得顆粒劑； 含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以10∶90比例的乙腈-0.4％磷酸溶液為流動相；檢測波長為327nm；理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品適量，加50％甲醇制成每1ml含20μg的溶液，作為對照品溶液，10℃以下保存；供試品溶液的制備取中藥組合物顆粒劑1.0g，研細(xì)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加50％甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色容量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得； 含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以55∶45比例的甲醇-2％醋酸溶液為流動相；檢測波長為280nm；理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取黃芩苷對照品適量，加70％乙醇制成每1ml含50μg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備取中藥組合物顆粒劑1.0g，研細(xì)，精密稱定，置100ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，功率250W，頻率50Hz條件下超聲處理30分鐘，放冷，用70％乙醇補(bǔ)足減失的量，搖勻，濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
實(shí)施例16顆粒劑 金銀花提取物100g、黃芩提取物40g 取金銀花，加水煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮2小時，第二次加水6倍量煎煮2小時，合并煎液，濾過，濾液加入石灰乳調(diào)節(jié)pH值至10～12，靜置，濾取沉淀，加水適量，用硫酸調(diào)節(jié)pH值至6～7，攪勻，濾過，濾液濃縮至稠膏狀，即得金銀花提取物；取黃芩，加至沸水中煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮1小時，第二次加水6倍量煎煮1小時，合并煎煮液，濾過，濾液加硫酸調(diào)節(jié)pH值至2，靜置，濾取沉淀，用乙醇適量洗滌后，干燥，即得黃芩提取物；取金銀花提取物100g、黃芩提取物40g，加庶糖粉800g與淀粉適量，攪拌均勻，制成顆粒，60℃以下干燥，制成1000g，即得顆粒劑； 含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以10∶90比例的乙腈-0.4％磷酸溶液為流動相；檢測波長為327nm；理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品適量，加50％甲醇制成每1ml含20μg的溶液，作為對照品溶液，10℃以下保存；供試品溶液的制備取中藥組合物顆粒劑1.0g，研細(xì)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加50％甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色容量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得； 含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以55∶45比例的甲醇-2％醋酸溶液為流動相；檢測波長為280nm；理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取黃芩苷對照品適量，加70％乙醇制成每1ml含50μg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備取中藥組合物顆粒劑1.0g，研細(xì)，精密稱定，置100ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，功率250W，頻率50Hz條件下超聲處理30分鐘，放冷，用70％乙醇補(bǔ)足減失的量，搖勻，濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得； 微生物限度檢查取供試品10g，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，振搖，使呈1∶10的供試品儲備液，取1∶10的供試品儲備液10ml，500轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，取上清液加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液補(bǔ)至10ml，3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，取底部集菌液2ml，加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液補(bǔ)至10ml，即為1∶10的供試液；細(xì)菌檢查采用離心加稀釋法，取1∶10的供試液1ml，分別注入5個平皿中，每皿0.2ml，依中國藥典2005年版一部附錄XIIIC法檢查，霉菌、酵母菌檢查取1∶10的供試品儲備液，依常規(guī)中國藥典2005年版一部附錄XIIIC法檢查；大腸埃希菌檢查取1∶10的供試品液，依中國藥典2005年版一部附錄XIIIC離心加稀釋法檢查；1g供試品中，細(xì)菌數(shù)不得過1000個，霉菌和酵母菌數(shù)不得過100個，大腸埃希菌不得檢出。
權(quán)利要求
1.一種清熱解毒、消炎的中藥組合物制劑，其特征在于該制劑的原料組成為金銀花提取物10-50重量份、黃芩提取物5-30重量份、糊精60-180重量份、甜菊素0.5-2.0重量份。
2.如權(quán)利要求1所述的一種清熱解毒、消炎的中藥組合物制劑，其特征在于該制劑的原料組成為金銀花提取物30重量份、黃芩提取物12重量份、糊精126.8重量份、甜菊素1.18重量份。
3.如權(quán)利要求1或2任一所述的一種清熱解毒、消炎的中藥組合物制劑的制備方法，其特征在于該方法為取金銀花，加水煎煮1-3次，第一次加水6-10倍量煎煮1-3小時，第二次加水4-8倍量煎煮1-3小時，合并煎液，濾過，濾液加入石灰乳調(diào)節(jié)pH值至10～12，靜置，濾取沉淀，加水適量，用硫酸調(diào)節(jié)pH值至6～7，攪勻，濾過，濾液濃縮至稠膏狀，即得金銀花提取物；取黃芩，加至沸水中煎煮1-3次，每次0.5-1.5小時，合并煎煮液，濾過，濾液加硫酸調(diào)節(jié)pH值至1-3，靜置，濾取沉淀，用乙醇適量洗滌后，干燥，即得黃芩提取物；將金銀花提取物、黃芩提取物、糊精、甜菊素按比例混合，制成顆粒劑。
4.如權(quán)利要求3所述的一種清熱解毒、消炎的中藥組合物制劑的制備方法，其特征在于該方法中為取金銀花，加水煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮2小時，第二次加水6倍量煎煮2小時，合并煎液，濾過，濾液加入石灰乳調(diào)節(jié)pH值至10～12，靜置，濾取沉淀，加水適量，用硫酸調(diào)節(jié)pH值至6～7，攪勻，濾過，濾液濃縮至稠膏狀，即得金銀花提取物；取黃芩，加至沸水中煎煮2次，每次1小時，合并煎煮液，濾過，濾液加硫酸調(diào)節(jié)pH值至2，靜置，濾取沉淀，用乙醇適量洗滌后，干燥，即得黃芩提取物；將金銀花提取物、黃芩提取物、糊精、甜菊素按比例混合，攪拌均勻，制成顆粒，60℃以下干燥，制成1000重量份，即得。
5.一種原料包含金銀花提取物、黃芩提取物的清熱解毒、消炎的中藥組合物制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該質(zhì)量控制方法包括如下含量測定和/或微生物限度檢查法中的一種或兩種或三種
A、含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以5-15∶50-150比例的乙腈-0.4％磷酸溶液為流動相；檢測波長為327nm；理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品適量，加40％-60％甲醇制成每1ml含10-30μg的溶液，作為對照品溶液，5℃-15℃以下保存；供試品溶液的制備取中藥組合物無糖型顆粒劑0.5-1.5g，研細(xì)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加40％-60％甲醇40-60ml，稱定重量，超聲處理20-40分鐘，放冷，再稱定重量，用40％-60％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液4-6ml，置15-35ml棕色容量瓶中，加40％-60％甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5-15μl，注入液相色譜儀，測定，即得；
B、含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以45-65∶35-55比例的甲醇-2％醋酸溶液為流動相；檢測波長為260-300nm；理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取黃芩苷對照品適量，加60-80％乙醇制成每1ml含40-60μg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備取中藥組合物制劑0.5-1.5g，研細(xì)，精密稱定，置80-120ml量瓶中，加60-80％乙醇至刻度，功率240-260W，頻率40-60Hz條件下超聲處理20-40分鐘，放冷，用60-80％乙醇補(bǔ)足減失的量，搖勻，濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5-15μl，注入液相色譜儀，測定，即得；
C、微微生物限度檢查法取供試品5-15g，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至80-120ml，振搖，使呈0.5-1.5∶5-15的供試品儲備液，取0.5-1.5∶5-15的供試品儲備液5-15ml，400-600轉(zhuǎn)/分離心3-8分鐘，取上清液加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液補(bǔ)至5-15ml，2800-3200轉(zhuǎn)/分離心10-30分鐘，取底部集菌液1-3ml，加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液補(bǔ)至5-15ml，即為0.5-1.5∶5-15的供試液；細(xì)菌檢查采用離心加稀釋法，取0.5-1.5∶5-15的供試液1ml，分別注入5個平皿中，每皿0.2ml，依中國藥典2005年版一部附錄XIIIC法檢查，霉菌、酵母菌檢查取0.5-1.5∶5-15的供試品儲備液，依常規(guī)中國藥典2005年版一部附錄XIIIC法檢查；大腸埃希菌檢查取0.5-1.5∶5-15的供試品液，依中國藥典2005年版一部附錄XIIIC離心加稀釋法檢查；1g供試品中，細(xì)菌數(shù)不得過800-1200個，霉菌和酵母菌數(shù)不得過80-120個，大腸埃希菌不得檢出。
6.如權(quán)利要求5所述的一種原料包含金銀花提取物、黃芩提取物的清熱解毒、消炎的中藥組合物制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該質(zhì)量控制方法中含量測定為
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以10∶90比例的乙腈-0.4％磷酸溶液為流動相；檢測波長為327nm；理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品適量，加50％甲醇制成每1ml含20μg的溶液，作為對照品溶液，10℃以下保存；供試品溶液的制備取中藥組合物中藥組合物制劑1.0g，研細(xì)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加50％甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色容量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
7.如權(quán)利要求5所述的一種原料包含金銀花提取物黃芩提取物的清熱解毒、消炎的中藥組合物制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該質(zhì)量控制方法中含量測定為
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以55∶45比例的甲醇-2％醋酸溶液為流動相；檢測波長為280nm；理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取黃芩苷對照品適量，加70％乙醇制成每1ml含50μg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備取中藥組合物中藥組合物制劑1.0g，研細(xì)，精密稱定，置100ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，功率250W，頻率50Hz條件下超聲處理30分鐘，放冷，用70％乙醇補(bǔ)足減失的量，搖勻，濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
8.如權(quán)利要求5所述的一種原料包含金銀花提取物、黃芩提取物的清熱解毒、消炎的中藥組合物制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該質(zhì)量控制方法中微生物限度檢查法為
微生物限度取供試品10g，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，振搖，使呈1∶10的供試品儲備液，取1∶10的供試品儲備液10ml，500轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，取上清液加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液補(bǔ)至10ml，3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，取底部集菌液2ml，加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液補(bǔ)至10ml，即為1∶10的供試液；細(xì)菌檢查采用離心加稀釋法，取1∶10的供試液1ml，分別注入5個平皿中，每皿0.2ml，依中國藥典2005年版一部附錄XIIIC法檢查，霉菌、酵母菌檢查取1∶10的供試品儲備液，依常規(guī)中國藥典2005年版一部附錄XIIIC法檢查；大腸埃希菌檢查取1∶10的供試品液，依中國藥典2005年版一部附錄XIIIC離心加稀釋法檢查；1g供試品中，細(xì)菌數(shù)不得過1000個，霉菌和酵母菌數(shù)不得過100個，大腸埃希菌不得檢出。
9.如權(quán)利要求5-8任一所述的一種原料包含金銀花提取物、黃芩提取物的清熱解毒、消炎的中藥組合物制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該質(zhì)量控制方法中無糖型顆粒劑原料組成為金銀花提取物30重量份、黃芩提取物12重量份、糊精126.8重量份、甜菊素1.18重量份，并通過如下方法制備
取金銀花，加水煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮2小時，第二次加水6倍量煎煮2小時，合并煎液，濾過，濾液加入石灰乳調(diào)節(jié)pH值至10～12，靜置，濾取沉淀，加水適量，用硫酸調(diào)節(jié)pH值至6～7，攪勻，濾過，濾液濃縮至稠膏狀，即得金銀花提取物；取黃芩，加至沸水中煎煮2次，每次1小時，合并煎煮液，濾過，濾液加硫酸調(diào)節(jié)pH值至2，靜置，濾取沉淀，用乙醇適量洗滌后，干燥，即得黃芩提取物；將金銀花提取物、黃芩提取物、糊精、甜菊素按比例混合，攪拌均勻，制成顆粒，60℃以下干燥，制成1000重量份，即得無糖型顆粒劑。
10.如權(quán)利要求5-8任一所述的一種原料包含金銀花提取物、黃芩提取物的清熱解毒、消炎的中藥組合物制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該質(zhì)量控制方法中顆粒劑原料包含金銀花提取物100重量份、黃芩提取物40重量份，并通過如下方法制備
取金銀花，加水煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮2小時，第二次加水6倍量煎煮2小時，合并煎液，濾過，濾液加入石灰乳調(diào)節(jié)pH值至10～12，靜置，濾取沉淀，加水適量，用硫酸調(diào)節(jié)pH值至6～7，攪勻，濾過，濾液濃縮至稠膏狀，即得金銀花提取物；取黃芩，加至沸水中煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮1小時，第二次加水6倍量煎煮1小時，合并煎煮液，濾過，濾液加硫酸調(diào)節(jié)pH值至2，靜置，濾取沉淀，用乙醇適量洗滌后，干燥，即得黃芩提取物；取金銀花提取物100重量份、黃芩提取物40重量份，加庶糖粉800重量份與淀粉適量，攪拌均勻，制成顆粒，60℃以下干燥，制成1000重量份，即得顆粒劑。
11.如權(quán)利要求5-8任一所述的一種原料包含金銀花提取物、黃芩提取物的清熱解毒、消炎的中藥組合物制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該質(zhì)量控制方法中膠囊劑原料包含金銀花提取物100重量份、黃芩提取物40重量份，并通過如下方法制備
取金銀花，加水煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮2小時，第二次加水6倍量煎煮2小時，合并煎液，濾過，濾液加入石灰乳調(diào)節(jié)pH值至10～12，靜置，濾取沉淀，加水適量，用硫酸調(diào)節(jié)pH值至6～7，攪勻，濾過，濾液濃縮至稠膏狀，即得金銀花提取物；取黃芩，加至沸水中煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮1小時，第二次加水6倍量煎煮1小時，合并煎煮液，濾過，濾液加硫酸調(diào)節(jié)pH值至2，靜置，濾取沉淀，用乙醇適量洗滌后，干燥，即得黃芩提取物；取金銀花提取物100重量份、黃芩提取物40重量份，加淀粉適量，均勻，60℃以下干燥，分裝入膠囊，制成1000重量份，即得膠囊劑。
12.一種清熱解毒、消炎的中藥組合物顆粒劑，其特征在于該制劑由如下方法制備
原料組成為金銀花提取物30重量份、黃芩提取物12重量份、糊精126.8重量份、甜菊素1.18重量份；取金銀花，加水煎煮2次，第一次加水8倍量煎煮2小時，第二次加水6倍量煎煮2小時，合并煎液，濾過，濾液加入石灰乳調(diào)節(jié)pH值至10～12，靜置，濾取沉淀，加水適量，用硫酸調(diào)節(jié)pH值至6～7，攪勻，濾過，濾液濃縮至稠膏狀，即得金銀花提取物；取黃芩，加至沸水中煎煮2次，每次1小時，合并煎煮液，濾過，濾液加硫酸調(diào)節(jié)pH值至2，靜置，濾取沉淀，用乙醇適量洗滌后，干燥，即得黃芩提取物；將金銀花提取物、黃芩提取物、糊精、甜菊素按比例混合，攪拌均勻，制成顆粒，60℃以下干燥，制成1000重量份，即得。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種中藥組合物制劑及制備方法和質(zhì)量控制方法，特別公開了一種清熱解毒、消炎的中藥組合物制劑及制備方法和質(zhì)量控制方法。本發(fā)明中藥組合物制劑原料組成為金銀花提取物10-50重量份、黃芩提取物5-30重量份、糊精60-180重量份、甜菊素0.5-2.0重量份。本發(fā)明中藥組合物無糖型顆粒劑將傳統(tǒng)工藝中原有的蔗糖、淀粉改為糊精、甜菊素，使得其除了具有一般顆粒劑的特點(diǎn)外，還具有藥物的穩(wěn)定性好、減少了藥物賦形劑用量和改善了中藥制劑形象、療效增強(qiáng)等優(yōu)勢。本發(fā)明還還公開了綠原酸含量測定和黃芩苷含量測定以及微生物限度檢查法。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明檢測專屬性好、穩(wěn)定性高、重現(xiàn)性好、精密度高。
文檔編號A61P29/00GK101744883SQ200810240340
公開日2010年6月23日 申請日期2008年12月19日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月19日
發(fā)明者付立家, 付建家 申請人:北京亞東生物制藥有限公司