專利名稱：：對(duì)酚酸類化合物羥乙基化的方法及其制品的制作方法對(duì)酚酸類化合物羥乙基化的方法及其制品本發(fā)明是一種合成技術(shù)，對(duì)酚酸類化合物羥乙基化的方法、特別是羥乙基化衍生物的制備方法及其制品。含有酚羥基、羧酸等酸性基團(tuán)的化合物(統(tǒng)稱酚酸類化合物)如黃酮苷和苷元、有機(jī)酸、單寧等普遍存在于植物、微生物中，具有廣泛的生物活性。但這些化合物由于溶解性差或穩(wěn)定性差或代謝過(guò)快，導(dǎo)致吸收差或生物利用度低，限制了這些化合物的開發(fā)和應(yīng)用。羥乙基衍生物的制備為一有效的選擇。臨床藥物曲克蘆丁或維腦路通為蘆丁分子中羥基的羥乙基化衍生物，不僅增大了蘆丁的溶解度，而且擴(kuò)大了其藥理作用和臨床應(yīng)用范圍(李茂星，謝景文，葛欣.蘆丁的藥效學(xué)研究進(jìn)展.華西藥學(xué)雜志，2000，15(6):450-451)。葛根素羥乙基化產(chǎn)物已經(jīng)證實(shí)了具有多種生物活性。因此，以黃酮類化合物為代表的酚酸類化合物的羥乙基化方法的有效建立，具有重要的意義。目前羥乙基化的方法主要是氯乙醇法(楊若林，李娜，BoXuan，等.葛根素衍生物的制備及其活性[J].中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，1999，30(2):81-85)和環(huán)氧乙烷法(侯殿杰，王建武，孫建龍.7，4:二-氧-(|3-羥乙基)葛根素的制備研究[J].中國(guó)藥物化學(xué)雜志，2002,12(2):103-104)。氯乙醇法存在收率低反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)的問題，不大適合大量樣品的制備；環(huán)氧乙烷法大多采用一定溫度下將環(huán)氧乙烷通入至反應(yīng)液內(nèi)，雖然得到了較高的收率，但環(huán)氧乙烷沸點(diǎn)低，極易氣化，且有較大毒性和較寬的爆炸極限，此操作方法在操作過(guò)程中存在諸多不便，且存在環(huán)境污染等問題。因此經(jīng)過(guò)反復(fù)試驗(yàn)和反應(yīng)條件的摸索，我們發(fā)現(xiàn)以環(huán)氧乙烷作為羥乙基化試劑，在催化量的無(wú)機(jī)堿作用下，封閉容器中，可高收率得到酚酸類化合物的羥乙基化產(chǎn)物，副產(chǎn)物少，后處理純化方便。本發(fā)明的目的在于提供一種對(duì)酚酸類化合物羥乙基化的方法及其制品；它以環(huán)氧乙烷為羥乙基化試劑，在密閉反應(yīng)器中，在一定溫度下和無(wú)機(jī)堿的作用下，對(duì)含有酚羥基、羧酸基團(tuán)的有機(jī)分子進(jìn)行羥乙基化，制備酚酸類化合物的羥乙基衍生物，從而達(dá)到增加酚酸類化合物的穩(wěn)定性和水溶性、改變了某些生物活性的效果。本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的一種對(duì)酚酸類化合物羥乙基化的方法，以環(huán)氧乙烷為羥乙基化試劑，在密閉反應(yīng)器中，在水和/或有機(jī)溶劑中，一定溫度下和無(wú)機(jī)堿的作用下，對(duì)含有酚羥基、羧酸基團(tuán)的有機(jī)分子進(jìn)行羥乙基化，制備酚酸類化合物的羥乙基衍生物。具體的說(shuō)以環(huán)氧乙烷為羥乙基化試劑，在承受壓力為5-6兆帕的密閉反應(yīng)器中、在水和/或有機(jī)溶劑中，反應(yīng)液溫度控制在50-8(TC之間，反應(yīng)時(shí)間為6-12小時(shí)，在無(wú)機(jī)堿的作用下，對(duì)含有酚羥基、羧酸基團(tuán)的有機(jī)分子進(jìn)行羥乙基化，制備酚酸類化合物的羥乙基衍生物。酚酸類化合物是指含有酚羥基(Ar-OH)和(或)羧酸基(COOH)的有機(jī)化合物(分子)；本發(fā)明所指含有酚羥基和羧基有機(jī)分子包括燈盞花乙素、巖豆素、槲皮素、葛根素、蘆丁、銀杏總黃酮、茶多酚、紅景天總黃酮、沒食子酸、苯甲酸或迷迭香酸。本發(fā)明最佳的的反應(yīng)液溫度為60-65t:、時(shí)間為9-10小時(shí)；采用的無(wú)機(jī)堿氫氧化鉀、氫氧化鈉、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉和碳酸氫鉀中的任意一種；用量為催化量，即0.05-0.2倍摩爾；最佳的無(wú)機(jī)堿用量為為0.1倍當(dāng)量。本發(fā)明采用溶劑為水，或有機(jī)溶劑甲醇，乙醇，異丙醇，正丁醇，丙酮，氯仿，二氯甲烷，苯，乙酸乙酯，二甲亞砜，妣啶，乙腈，四氫呋喃，1，4-二氧六環(huán)中的任一或混合組合。具體地說(shuō)，按照體積比計(jì)算，本發(fā)明采用的溶劑為甲醇/水i:99:i或者是乙醇/水i:99:l或者是氯仿/甲醇i:99:l或者是二氯甲烷/乙腈i:99:i。本發(fā)明中，收集反應(yīng)后的母液或粗品用大孔樹脂、聚酰胺、硅膠柱層析或反相硅膠柱層析的方法處理、分離和純化。本發(fā)明使用的反應(yīng)容器為用不銹鋼或聚四氟乙烯材質(zhì)制作，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)這樣的容器比較安全。本發(fā)明對(duì)酚酸類化合物羥乙基化的方法所得到的產(chǎn)品。為了達(dá)到更佳的效果，本發(fā)明進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)中優(yōu)選了如下技術(shù)方案—、羥乙基化反應(yīng)及條件優(yōu)化由于葛根素可以大量購(gòu)買和羥乙基葛根素為生物活性物質(zhì)，因此，以葛根素為原料來(lái)優(yōu)化酚酸類化合物的反應(yīng)條件，建立其制備方法。1.材料和儀器葛根素(上海君創(chuàng)生物科技有限公司，>95%);環(huán)氧乙烷(分析純國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；氫氧化鈉(分析純，成都金山化學(xué)試劑有限公司)；高壓密封反應(yīng)罐(可采用高壓密封消化罐，也可自制；AB-8大孔吸附樹脂(天津南開和成科技有限公司)；色譜純甲醇；0.1%磷酸水溶液。IN0V0400腿z核磁共振波譜儀(美國(guó)瓦里安公司)，四甲基硅烷(TMS)為內(nèi)標(biāo)；HEWLETTPAKARD質(zhì)譜儀；Agilent1100高效液相色譜儀(AgilentIIOO色譜工作站)。2.合成路線和步驟將精密稱重的葛根素加到高壓密封消化罐內(nèi)，加一定體積的水(A)，一定摩爾比的氫氧化鈉(B)，冰浴冷卻至較低溫度(0_5°C)，加一定體積環(huán)氧乙烷(D)，密封，放入一定溫度的水浴中攪拌反應(yīng)6小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液冷卻至室溫，經(jīng)大孔樹脂(AB-8)吸附，水洗除雜后，用甲醇洗脫，濃縮，得到羥乙基葛根素粗品。合成路線圖。HO、Glc人—,、丫o—OH+Y70H。0。'、-丄3.對(duì)照品和含量測(cè)定方法的建立采用環(huán)氧乙烷法合成羥乙葛根素對(duì)照品，運(yùn)用核磁共振技術(shù)結(jié)合質(zhì)譜數(shù)據(jù)分析確定了結(jié)構(gòu)(谷小珂，張建新，朱海燕，楊小生，郝小江，羥乙基葛根素的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)現(xiàn)象，中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，40(1):51-53)。HPLC檢測(cè)其純度為一個(gè)單峰。檢測(cè)方法WaterssunfireC-18色譜柱(4.6X150)，流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸水溶液(25:75)，流速1.Oml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)250nm，柱溫35。C，進(jìn)樣量1.Oml。樣品的測(cè)定羥乙基葛根素粗品和精密稱重的對(duì)照品均用色譜純甲醇定容至25ml，自動(dòng)進(jìn)樣，通過(guò)對(duì)比羥乙基葛根素的峰面積來(lái)計(jì)算粗品中羥乙基葛根素的質(zhì)量，從而計(jì)算反應(yīng)產(chǎn)率。4.正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)化合成工藝設(shè)置反應(yīng)溶劑體積(A)、葛根素和氫氧化鈉的摩爾比(B)、反應(yīng)溫度(C)、環(huán)氧乙烷的量(D)四個(gè)因素進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)以優(yōu)化其合成工藝。每個(gè)因素確定三個(gè)水平，因素水平見表l。表1因素和水平正交表<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>根據(jù)上述因素和水平，以羥乙基葛根素的含量作為考察指標(biāo)，列出L9(34)正交設(shè)計(jì)表，結(jié)果見表2。表2正交試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明四個(gè)因素的影響次序?yàn)锳>D>B>C，最佳反應(yīng)條件為4B^》:用上述優(yōu)化出的反應(yīng)條件對(duì)反應(yīng)時(shí)間做單因素考察。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。表3時(shí)間單因素實(shí)驗(yàn)的結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>對(duì)優(yōu)化出來(lái)的條件做了穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，收率為90.83%和92.81%，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明確定的反應(yīng)條件可行。4.羥乙基葛根素的純化反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液冷卻至室溫，經(jīng)大孑L樹脂吸附(D101或AB-8)或聚酰胺材料，水洗除雜后，用甲醇洗脫，濃縮，得到羥乙基葛根素；進(jìn)一步精制可采用硅膠、凝膠柱層析。采用新的羥乙基花方法來(lái)制備羥乙基葛根素，彌補(bǔ)了已有方法的弊端，簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作，減少了環(huán)境污染。總之，基于現(xiàn)有羥乙基葛根素的制備工藝問題，我們發(fā)現(xiàn)了一種新的、可通用的酚酸類化合物的羥乙基化方法方法在一定溫度(5080°C)下，以環(huán)氧乙烷為羥乙基化試劑，在密封耐壓反應(yīng)器中，催化量堿氫氧化鈉水溶液的作用下，在水或有機(jī)溶劑中反應(yīng)，可高收率地將酚酸類化合物轉(zhuǎn)化成為羥乙基衍生物。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于1)本發(fā)明提供的對(duì)酚酸類化合物的羥乙基化方法未見文獻(xiàn)報(bào)道。2)本發(fā)明提供的對(duì)酚酸類化合物的羥乙基化方法具有通用性和實(shí)用性彌補(bǔ)了已有方法的弊端，簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作，減少了環(huán)境污染。3)本發(fā)明提供的羥乙基化酚酸類化合物保持或延展了原型化合物的生物活性；改善了原型化合物的水溶性。為驗(yàn)證本
發(fā)明內(nèi)容可行性，我們利用如上優(yōu)化的羥乙基化方法，開展了如下典型酚酸類化合物的羥乙基化反應(yīng)及其羥乙基化物的活性研究。附圖l是用反應(yīng)收率和時(shí)間作折線制作的圖，表明9-10h為本發(fā)明最佳反應(yīng)時(shí)間。附圖2是本發(fā)明HPLC檢測(cè)其純度為一個(gè)單峰的實(shí)驗(yàn)圖。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:燈盞花乙素的羥乙基化燈盞花乙素lOOmg(O.22mmol)，置于高壓密封消化罐內(nèi)，加25ml水分散，加氫氧化鈉0.87mg(0.022mmol)，冰浴冷卻后加環(huán)氧乙烷2ml，密封后置于6(TC水浴中反應(yīng)10h。反應(yīng)液上大孔樹脂(AB-8)，水洗除雜后用甲醇洗脫，濃縮后濕法上樣，聚酰胺柱層析，乙酸乙酯甲醇10:1洗脫，得目標(biāo)產(chǎn)物DZH-1(淡黃色粉末96mg，收率74.7%)。目標(biāo)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)及波譜數(shù)據(jù)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>L)ZH-1DZH-1:淡黃色粉末MS-ESI:617[M+Na]+，595[M+H]+，EI-MS:418(苷元，1)，400(1)374(31)，356(21)，330(100)，286(17)，168(15),HNMR(DMS0，400MHz)，？12.96(1H，sAr-0H)，8.03(2H，d，J=9Hz，C2',6'_H)，7.12(2H，d，J=9Hz，C3',5'_H)，7.06(1H，s，C3_H)6.93(1H，s，C8-H)，4.825.60(糖上質(zhì)子)，3.964.23(6H，m，Cal,a2,a3_H)，3.603.75(6Hm，Cbl,b2,b3-H);13CNMR(DMSO，100MHz)，？182.5(C-4)，168.9(C-6—)，164.0(C-2)162.0(C-4—)，156.1(C-7)，152.7(C_8a)，152.2(C_5)，131.6(C_6)，128.5(C_2，，6，)122.7(C-r)，115.l(C-3，，5，)，106.1(C_4a)，103.4(C—l——)，99.7(C_3)，94.1(C_8)，75.575.4，73.0，71.3(糖上碳信號(hào))，74.6，70.0，66.6(Cal，Ca2，Ca3)，60.3，59.5，59.5，58.8(CblCb2，Cb3)實(shí)施例2:巖豆素羥乙基化巖豆素lOOmg(O.29mmol)置于高壓密封消化罐中，25ml甲醇溶解，加氫氧化鈉1.16mg(0.029mmol)，冰浴冷卻后，加環(huán)氧乙烷2ml，密封，置于65。C水浴中，反應(yīng)9h.反應(yīng)結(jié)束后，濃縮反應(yīng)液，經(jīng)大孔樹脂后采用制備薄層法分離純化，展開系統(tǒng)為氯仿甲醇20:1展開。得產(chǎn)物YDS-l(黃色固體粉末36mg，收率57.3%)，YDS-2(黃色固體粉末46mg，收率81.6%)，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定YDS-l為雙羥乙基取代巖豆素，YDS-2為單羥乙基取代的巖豆素。目標(biāo)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)及波譜數(shù)據(jù)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>YDS-l:黃色固體粉末EI-MS:432(M+，6)，414(M+-18，52)，401(M+-31，100)，388(M+-44,18)，373(24)，355(34)，341(49)，329(47)，301(13),H畫R(CDCl3，400MHz)，？7.87(2H，d，J=9Hz，C2',6'_H)，7.03(2H，d，J=9Hz，C3',5'_H)，6.64(1H，s，C3_H)，4.324.39(4H，m，Cal,a2_H)，3.853.88(4H，m，Cbl,b2_H)，4.07，3.95，3.86(9H，s，_0CH3);13CNMR(CDC13，100MHz)，？178.5(C-4)，162.5(C-2)，161.8(C-4—)，150.5(C-8a)，147.8(C_7)，147.7(C_6)，143.9(C_5)，138.3(C_8)，127.8(C-2'，6')，123.2(C_r)，114.7(C-4a)，114.6(C-3，，5，)，106.7(C_3)，77.2and76.2(Cal，Ca2)，61.5and61.3(Cbl，Cb2)，62.3，61.4，55.5(-0CH3).YDS-2:黃色固體粉末EI-MS:388(M+，100)，373(M+_15，73)，355(9)，344(M+_44，4)，329(70)，315(7)，301(19)，286(7),HNMR(CDCl3，400MHz)，？12.66(1H，s，C5_0H)，7.89(2H，d，J=9Hz，C2',6'-H)，7.04(2H，d，J=9Hz，C3',5'_H)，6.62(1H，s，C3_H)，4.374.39(2H，m，Ca「H)，3.703.85(2H，m，Cb「H)，4.02，3.99，3.90(9H，s，_0CH3);13CNMR(CDC13，100MHz)，？183.0(C_4)，164.1(C_2)，162.8(C_4—)，151.3(C_5)，149.6(C_8a)，145.7(C_7)，136.8(C-6)，133.4(C-8)，128.1(C_2，，6，)，123.2(C_1—)，114.6(C_3，，5，)，107.5(C_4a)，103.8(C-3)，76.3(Cal)，61.4(Cbl)62.2，61.2，55.5(_0CH3).實(shí)施例3:槲皮素羥乙基化取槲皮素(lOOmg，0.33mmoL)用25mL甲醇溶解，轉(zhuǎn)移到高壓密封消化罐內(nèi)，加催化量的氫氧化鈉(1.32mg，0.033mmoL)，冰浴冷卻，加環(huán)氧乙烷2mL，密封后置于6(TC水浴中反應(yīng)9h，將反應(yīng)液濃縮、大孔樹脂預(yù)處理后，硅膠柱層析，氯仿甲醇15:l洗脫，得目標(biāo)產(chǎn)物HPS-l(淡黃色粉末139mg)，收率為88X。經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定產(chǎn)物為四羥乙基槲皮素。目標(biāo)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)及波譜數(shù)據(jù)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>HPS-1:淡黃色粉末EI-MS:478(M+，100)，460(M+-18，99)，434(M+-44，44)，416(26)，390(18)，346(33)，302(36)，197(15),匪R(DMS0，400MHz)，？12.59(1H，s，C5-0H)，7.81(1H，s，C2'-H)，7.79(1H，d，J=9Hz，C6'_H)，7.14(1H，d，J=9Hz，C5'_H)，6.77(1H，s，C8-H)，6.35(1H，s，C6_H)，4.014.12(8H，m，Cal,a2,a3,a4_H)，3.603.76(8H，m，Cbi,b2,b3,b4—H);13CNMR(DMSO，100MHz)，？178.2(C_4)，164.7(C_7)，160.9(C_5)，156.4(C_5)，155.4(C_2)，151.2(C_4—)，148.0(C_3—)，137.4(C_3)，122.5(C_6，)，122.3(C_r)，113.8(C_2—)，113.0(C_5，)，105.2(C_4a)，98.3(C_6)，92.9(C_8)，73.9，70.7，70.6，70.4(Cal，Ca2，Ca3，Ca4)，60.3，59.7，59.5，59.4(Cbl，Cb2，Cb3，Cb4)實(shí)施例4:銀杏總提物的羥乙基化銀杏總黃酮220mg(含量大于70%)，分置兩個(gè)高壓密封消化罐內(nèi)，各加水25ml，氫氧化鈉0.5mg，冰浴冷卻后加環(huán)氧乙烷2ml，密封后置于5(TC水浴中反應(yīng)12h。反應(yīng)結(jié)束后，上大孔樹脂(AB-8)水洗除雜后甲醇洗脫，濃縮得羥乙基化粗品256mg.通過(guò)核磁共振氫譜檢測(cè)，羥乙基化銀杏總黃酮在化學(xué)位移？.1-4.8ppm間出現(xiàn)相似的羥乙基質(zhì)子信號(hào)。實(shí)施例5:茶多酚的羥乙基化茶多酚1.0g(含量大于85%)，分置兩個(gè)高壓密封消化罐內(nèi)，各加25ml水，氫氧化鈉0.75mg，冰浴冷卻后加環(huán)氧乙烷3ml，密封后置于8(TC水浴中反應(yīng)16h。反應(yīng)結(jié)束后，上大孔樹脂(AB-8)水洗除雜后甲醇洗脫，濃縮得羥乙基化粗品750mg.通過(guò)核磁共振氫譜檢測(cè)，羥乙基化茶多酚在化學(xué)位移？.0-5.Oppm間出現(xiàn)相似的羥乙基質(zhì)子信號(hào)。實(shí)施例6:羥乙基葛根素和羥乙基燈盞花素水溶性的測(cè)試黃酮化合物羥乙基化研究的目的是希望增加其水溶性、化學(xué)穩(wěn)定性，以提高生物利用度，降低體內(nèi)代謝速度。因此，對(duì)合成的兩個(gè)羥乙基化黃酮化合物的水溶解性和原料做了對(duì)比實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)方法稱取一定質(zhì)量的樣品于試管內(nèi)，量取一定體積的分析純甲醇和蒸餾水，將之緩慢滴加入試管內(nèi)使樣品溶解(室溫下)，當(dāng)樣品完全溶解時(shí)，計(jì)算加入的體積。通過(guò)比較原料和羥乙基化產(chǎn)物加入溶劑的體積，定性的比較結(jié)構(gòu)修飾前后的溶解性差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)lOmg葛根素室溫下(操作時(shí)溫度26°C)用分析純甲醇0.2ml能完全溶解，若用蒸餾水需5ml完全溶解。lOmg羥乙基葛根素室溫下(操作時(shí)溫度26°C)用分析純甲醇1.8ml(少許加熱)能完全溶解，若用蒸餾水需2.5ml完全溶解。(2)2mg燈盞花素室溫下(操作時(shí)溫度23°C)用分析純甲醇0.23ml能完全溶解，若用蒸餾水加入3ml加熱、或超聲震蕩仍有大部分未溶。2mg羥乙基燈盞花素室溫下(操作時(shí)溫度23°C)加入分析純甲醇2.Oml仍有少許不溶物，若用蒸餾水需1.5ml完全溶解。結(jié)論通過(guò)平行實(shí)驗(yàn)對(duì)比，能顯著看到羥乙基后，產(chǎn)物的脂溶性均降低，水溶性顯著提高。本發(fā)明得到的羥乙基化衍生物具有穩(wěn)定性和水溶性增加，改變或延展了某些生物活性。為此，我們還做了以下的實(shí)驗(yàn)羥乙基化衍生物的生物活性比較1.抗血小板聚集活性采用誘導(dǎo)劑(PAF、ADP)誘導(dǎo)血小板聚集，根據(jù)正常血小板最大聚集率與加入樣品后血小板最大聚集率來(lái)判斷樣品對(duì)血小板聚集有無(wú)抑制作用以及作用的強(qiáng)弱。抑制率的計(jì)算公式如下抑制率(％)=(正常聚集對(duì)照組最大聚集率-樣品組最大聚集率)/正常聚集對(duì)照組最大聚集率X100結(jié)果如下(1)對(duì)PAF(血小板活化因子，終濃度4.5nmol/L)誘導(dǎo)的血小板聚集的抑制作用(表4)結(jié)果如下表4對(duì)PAF誘導(dǎo)的血小板聚集的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注ggs為葛根素，dzh為燈盞花乙素ggs-l為羥乙基葛根素dzh-1為羥乙基燈盞花乙素(2)對(duì)ADP(終濃度為5橋ol/L)誘導(dǎo)的血小板聚集的抑制作用(表5)結(jié)果如下表5對(duì)ADP誘導(dǎo)的血小板聚集的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注ggs為葛根素，dzh為燈盞花乙素；ggs-l為羥乙基葛根素；dzh-1為羥乙基燈盞花乙素從上述活性篩選結(jié)果看(1)在對(duì)抗PAF誘導(dǎo)的血小板聚集抑制活性模型上，燈盞花乙素羥乙基化產(chǎn)物(DZH-1)有一定的抑制作用，且較燈盞花乙素(DZH)效果好；葛根素羥乙基化物(ggs-1)沒有活性；(2)在對(duì)抗ADP誘導(dǎo)的血小板聚集抑制活性模型上，葛根素羥乙基化物(ggs-1)的活性略高于葛根素(ggs);燈盞花乙素羥乙基化產(chǎn)物(DZH-1)的抑制活性低于燈盞花乙素(DZH)。從總體上看，黃酮化合物經(jīng)羥乙基化后，其羥乙基化衍生物的體外血小板聚集抑制活性與原型化合物活性相當(dāng)或有變化2.抗H202致PC12細(xì)胞損傷保護(hù)作用首先用MTT法評(píng)價(jià)樣品在預(yù)設(shè)濃度下對(duì)PC12細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制程度，確定合適的樣品濃度，再通過(guò)H202致PC12細(xì)胞損傷模型評(píng)價(jià)樣品對(duì)H202損傷的抑制作用。具體為將特定濃度的樣品預(yù)作用PC12細(xì)胞24小時(shí)后，棄去含樣品的培養(yǎng)液，加入含H202的培養(yǎng)基作用一定時(shí)間致PC12損傷后，加入過(guò)氧化氫酶終止損傷，培養(yǎng)24小時(shí)后，MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活或生長(zhǎng)情況，計(jì)算樣品對(duì)H202損傷的抑制率，由抑制率的大小評(píng)價(jià)樣品活性情況。結(jié)果如下表6所示表6對(duì)H202誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷保護(hù)活性<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注ggs為葛根素；YDS為巖豆素CDFC茶多酚；ggS-l為羥乙基葛根素；dzh-l為羥乙基燈盞花乙素CDF為茶多酚羥乙基化物；YDS-2和YDS-2為巖豆素的羥乙基化物；HPS-1為斛皮素羥乙基化物。VE為生育酚。以上結(jié)果顯示(1)除了葛根素ggs對(duì)H202誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷只有微弱保護(hù)作用外，羥乙基化物燈盞花素(DZH-1)、巖豆素(YDS-2)、槲皮素(HPS-1)、CDF茶多酚(CDF)、均具有細(xì)胞損傷保護(hù)活性，且較VE為生育酚(VE)作用強(qiáng)。(2)羥乙基化葛根素(ggs-1)比葛根素(ggs)的活性高?？傊u乙基化黃酮衍生物保持了H202誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷保護(hù)活性，且活性有所增加，其中槲皮素(HPS-1)活性較好。權(quán)利要求一種對(duì)酚酸類化合物羥乙基化的方法，其特征在于以環(huán)氧乙烷為羥乙基化試劑，在密閉反應(yīng)器中，在水和/或有機(jī)溶劑中，一定溫度下和無(wú)機(jī)堿的作用下，對(duì)含有酚羥基、羧酸基團(tuán)的有機(jī)分子進(jìn)行羥乙基化，制備酚酸類化合物的羥乙基衍生物。2.按照權(quán)利要求1所述的對(duì)酚酸類化合物羥乙基化的方法，其特征在于以環(huán)氧乙烷為羥乙基化試劑，在承受壓力為5-6兆帕的密閉反應(yīng)器中、在水和/或有機(jī)溶劑中，反應(yīng)液溫度控制在50-8(TC之間，反應(yīng)時(shí)間為6-12小時(shí)，在無(wú)機(jī)堿的作用下，對(duì)含有酚羥基、羧酸基團(tuán)的有機(jī)分子進(jìn)行羥乙基化，制備酚酸類化合物的羥乙基衍生物。3.按照權(quán)利要求1或2所述的對(duì)酚酸類化合物羥乙基化的方法，其特征在于含有酚羥基和羧基有機(jī)分子包括燈盞花乙素、巖豆素、槲皮素、葛根素、蘆丁、銀杏總黃酮、茶多酚、紅景天總黃酮、沒食子酸、苯甲酸或迷迭香酸。4.按照權(quán)利要求或1或2中所述的對(duì)酚酸類化合物羥乙基化的方法，其特征在于反應(yīng)液溫度為60-65t:、時(shí)間為9-10小時(shí)。5.按照權(quán)利要求1或2中所述的對(duì)酚酸類化合物羥乙基化的方法，其特征在于采用的無(wú)機(jī)堿氫氧化鉀、氫氧化鈉、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉和碳酸氫鉀中的任意一種；用量為催化量，即0.05-0.2倍摩爾。6.按照權(quán)利要求5中所述的對(duì)酚酸類化合物羥乙基化的方法，其特征在于采用的無(wú)機(jī)堿用量為為0.1倍當(dāng)量。7.按照權(quán)利要求1或2中所述的對(duì)酚酸類化合物羥乙基化的方法，其特征在于采用溶劑為水，或有機(jī)溶劑甲醇，乙醇，異丙醇，正丁醇，丙酮，氯仿，二氯甲烷，苯，乙酸乙酯，二甲亞砜，吡啶，乙腈，四氫呋喃，1，4-二氧六環(huán)中的任一或混合組合。8.按照權(quán)利要求7中所述的對(duì)酚酸類化合物羥乙基化的方法，其特征在于按照體積比計(jì)算，采用溶劑代表為甲醇/水i:99:l或者是乙醇/水i:99:i或者是氯仿/甲醇i:99:l或者是二氯甲烷/乙腈i:99:i。9.按照權(quán)利要求1或2所述的對(duì)酚酸類化合物羥乙基化的方法，其特征在于收集反應(yīng)后的母液或粗品用大孔樹脂、聚酰胺、硅膠柱層析或反相硅膠柱層析的方法處理、分離和純化。10.按照權(quán)利要求1或2所述的對(duì)酚酸類化合物羥乙基化的方法，其特征在于反應(yīng)容器為用不銹鋼或聚四氟乙烯材質(zhì)制作。11.如權(quán)利要求1或2所述的對(duì)酚酸類化合物羥乙基化的方法所得到的產(chǎn)品。全文摘要本發(fā)明提供一種對(duì)酚酸類化合物羥乙基化的方法及其制品；以環(huán)氧乙烷為羥乙基化試劑，催化量堿的作用下，在耐壓密封容器中，一定溫度下進(jìn)行羥乙基化反應(yīng)。通過(guò)本方法，可高收率得到羥乙基產(chǎn)物，且副產(chǎn)物少，后處理方便。成功地將該方法應(yīng)用在不同類型的酚酸類化合物的羥乙基化產(chǎn)物的合成中，提高了其穩(wěn)定性和水溶性，改變或延展了生物活性，為廣泛開發(fā)和應(yīng)用酚酸類羥乙基化衍生物提供了關(guān)鍵的制備方法和技術(shù)。文檔編號(hào)C07D311/00GK101723768SQ200910311838公開日2010年6月9日申請(qǐng)日期2009年12月18日優(yōu)先權(quán)日2009年12月18日發(fā)明者朱海燕,楊娟,楊小生,谷小珂,郝小江,馬琳申請(qǐng)人:貴州省中國(guó)科學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室