一種草烏甲素的制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及天然藥物制備領(lǐng)域，具體涉及一種草烏甲素的制備方法；包括提取、萃取分離、柱層析分離純化和結(jié)晶純化四個(gè)步驟；本發(fā)明提供的草烏甲素的制備方法，通過(guò)用氧化鋁柱層析來(lái)替代硅膠柱層析，節(jié)約了生產(chǎn)成本；用二元系統(tǒng)的石油醚?二乙胺作為洗脫劑，便于回收再利用，減少環(huán)境污染。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一種草烏甲素的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及天然藥物制備領(lǐng)域，具體涉及一種草烏甲素的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 毛茛科烏頭屬植物草烏及附子是我國(guó)的傳統(tǒng)中藥材，常用于治療風(fēng)濕和類(lèi)風(fēng)濕性 關(guān)節(jié)炎及坐骨神經(jīng)痛等急癥。其水煎液曾被用于緩解晚期腫瘤病人的疼痛。而草烏甲素是 其主要的活性成分之一，具有中樞鎮(zhèn)痛和外周鎮(zhèn)痛的雙重藥理作用，且鎮(zhèn)痛時(shí)間長(zhǎng)、無(wú)成癮 性的特點(diǎn)。其副作用小，對(duì)各重要器官無(wú)明顯損傷、無(wú)致畸作用，目前臨床主要用于帶狀皰 疹及癌癥晚期疼痛、風(fēng)濕及類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、肩周炎、良性關(guān)節(jié)痛等急慢性疼痛疾患的治療， 效果顯著。
[0003] 草烏甲素分子式C35H4901QN，分子量643.77，為無(wú)色棱狀晶體或白色粉末，易溶于乙 醚、三氯甲烷、乙醇中。研究結(jié)果表明其在水中溶解度小（166.78yg/mL)且不穩(wěn)定，在室溫下 易發(fā)生降解，而其溶解度及穩(wěn)定性隨pH值的降低而增加，制備困難。
[0004] 中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利授權(quán)公告號(hào)CN 101555227 B公開(kāi)了一種用酸醇提取法制備高純度 草烏甲素的方法，該方法在純化步驟中采用的層析材料為硅膠(200-300目），用量較大，且 成本較高;洗脫劑為三元系統(tǒng)的石油醚/環(huán)己烷-丙酮-二乙胺，溶劑回收后極性發(fā)生改變， 不容易回收再利用，成本高且方法步驟復(fù)雜。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種草烏甲素的制備方法，通過(guò)用氧化鋁柱 層析來(lái)替代硅膠柱層析，節(jié)約了生產(chǎn)成本；用二元系統(tǒng)的石油醚-二乙胺作為洗脫劑，便于 回收再利用，減少環(huán)境污染。
[0006] 為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：
[0007] -種草烏甲素的制備方法，包括如下步驟：
[0008] S1、選料:選取干燥的滇西烏頭塊根，粉碎至50-100目，備用；
[0009] S2、提取:將步驟S1得到的烏頭塊根用95 %的乙醇浸潤(rùn)16-20h，再用8-10倍量的乙 醇分3-5次對(duì)其進(jìn)行提取，合并滲濾液，濃縮至膏狀，得浸膏；
[0010] S3、萃取分離：用1.5%的鹽酸溶解步驟S1所得的浸膏，過(guò)濾，得酸液，用25%濃氨 水將其pH調(diào)至10,然后加入1-2體積倍液的乙酸乙酯，振動(dòng)萃取30-45min，靜置分離，取上層 清液，重復(fù)萃取3-4次，合并萃取液，減壓回收至膏狀，得粗總堿；
[0011] S4、柱層析分離純化:將步驟S2所得的粗總堿用氯仿溶解，并吸附于1-2倍量的硅 膠上進(jìn)行拌樣，自然風(fēng)干后，進(jìn)行氧化鋁柱層析，用8-15:1的石油醚-二乙胺進(jìn)行梯度洗脫， 控制流速為8-12ml/min，收集洗脫液，以純草烏甲素為對(duì)照，用薄層色譜TLC跟蹤檢測(cè)，合并 主要含有草烏甲素的流份，回收全部溶劑，得草烏甲素粗品；
[0012] S5、結(jié)晶純化:將步驟S3所得的草烏甲素粗品用5-8體積倍數(shù)的丙酮溶解，真空濃 縮至1/4體積，再進(jìn)行結(jié)晶和重結(jié)晶，至晶體顏色成均一的白色，得草烏甲素純品。
[0013]進(jìn)一步的，所述步驟S3的柱層析中氧化鋁的用量為粗總堿量的5-8倍。
[0014]進(jìn)一步的，所述柱層析中氧化鋁的粒徑為200-300目。
[0015]本發(fā)明的有益效果在于：
[0016] 1、本發(fā)明用氧化鋁柱層析來(lái)替代硅膠柱層析，氧化鋁經(jīng)處理后可重復(fù)利用，平均 生產(chǎn)每公斤產(chǎn)品可節(jié)約生產(chǎn)成本250-400元，提高了生產(chǎn)效益；
[0017] 2、本發(fā)明用二元系統(tǒng)的石油醚-二乙胺作為洗脫劑，便于回收再利用，有助于減少 環(huán)境污染，且改善了生產(chǎn)操作人員的工作環(huán)境；
[0018] 3、用本發(fā)明提供的制備方法得到的草烏甲素純度高，產(chǎn)品質(zhì)量好。
【附圖說(shuō)明】
[0019] 為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn) 有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見(jiàn)地，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái) 講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。
[0020] 圖1為實(shí)施例1提供的制備方法所得到的草烏甲酸的HPLC檢測(cè)結(jié)果圖；
[0021] 圖2為實(shí)施例2提供的制備方法所得到的草烏甲酸的HPLC檢測(cè)結(jié)果圖；
[0022] 圖3為實(shí)施例3提供的制備方法所得到的草烏甲酸的HPLC檢測(cè)結(jié)果圖。
【具體實(shí)施方式】
[0023]為使本發(fā)明實(shí)施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將結(jié)合本發(fā)明的實(shí)施 例，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域 普通技術(shù)人員在沒(méi)有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù) 的范圍。
[0024] 實(shí)施例1:
[0025] S1、選料:選取干燥的滇西烏頭塊根，粉碎至50-100目，備用；
[0026] S2、提取:將步驟S1得到的烏頭塊根用95 %的乙醇浸潤(rùn)18h，再用8倍量的乙醇分5 次對(duì)其進(jìn)行提取，合并滲濾液，濃縮至膏狀，得浸膏；
[0027] S3、萃取分離：用1.5%的鹽酸溶解步驟S1所得的浸膏，過(guò)濾，得酸液，用25%濃氨 水將其pH調(diào)至10,然后加入1體積倍液的乙酸乙酯，振動(dòng)萃取30-45min，靜置分離，取上層清 液，重復(fù)萃取3次，合并萃取液，減壓回收至膏狀，得粗總堿；
[0028] S4、柱層析分離純化:將步驟S2所得的粗總堿用氯仿溶解，并吸附于2倍量的硅膠 上進(jìn)行拌樣，自然風(fēng)干后，用6體積倍量的粒徑為250目的氧化鋁作為填充劑進(jìn)行柱層析，用 12:1的石油醚-二乙胺進(jìn)行梯度洗脫，控制流速為8-12ml/min，收集洗脫液，以純草烏甲素 為對(duì)照，用薄層色譜TLC跟蹤檢測(cè)，合并主要含有草烏甲素的流份，回收全部溶劑，得草烏甲 素粗品35.6g;
[0029] S5、結(jié)晶純化:將步驟S3所得的草烏甲素粗品用175ml的丙酮溶解，真空濃縮至1/4 體積，再進(jìn)行結(jié)晶和重結(jié)晶，至晶體顏色成均一的白色，得草烏甲素純品24.5g。
[0030] 實(shí)施例2:
[0031] S1、選料:選取干燥的滇西烏頭塊根，粉碎至50-100目，備用；
[0032] S2、提取:將步驟S1得到的烏頭塊根用95 %的乙醇浸潤(rùn)16h，再用10倍量的乙醇分3 次對(duì)其進(jìn)行提取，合并滲濾液，濃縮至膏狀，得浸膏；
[0033] S3、萃取分離：用1.5%的鹽酸溶解步驟S1所得的浸膏，過(guò)濾，得酸液，用25%濃氨 水將其pH調(diào)至10,然后加入2體積倍液的乙酸乙酯，振動(dòng)萃取30-45min，靜置分離，取上層清 液，重復(fù)萃取4次，合并萃取液，減壓回收至膏狀，得粗總堿；
[0034] S4、柱層析分離純化:將步驟S2所得的粗總堿用氯仿溶解，并吸附于1倍量的硅膠 上進(jìn)行拌樣，自然風(fēng)干后，用6體積倍量的粒徑為200目的氧化鋁作為填充劑進(jìn)行柱層析，用 8:1的石油醚-二乙胺進(jìn)行梯度洗脫，控制流速為8-12ml/min，收集洗脫液，以純草烏甲素為 對(duì)照，用薄層色譜TLC跟蹤檢測(cè)，合并主要含有草烏甲素的流份，回收全部溶劑，得草烏甲素 粗品40. lg;
[0035] S5、結(jié)晶純化:將步驟S3所得的草烏甲素粗品用280ml的丙酮溶解，真空濃縮至1/4 體積，再進(jìn)行結(jié)晶和重結(jié)晶，至晶體顏色成均一的白色，得草烏甲素純品23.5g。
[0036] 實(shí)施例3:
[0037] S1、選料:選取干燥的滇西烏頭塊根，粉碎至50-100目，備用；
[0038] S2、提取:將步驟S1得到的烏頭塊根用95 %的乙醇浸潤(rùn)820h，再用9倍量的乙醇分4 次對(duì)其進(jìn)行提取，合并滲濾液，濃縮至膏狀，得浸膏；
[0039] S3、萃取分離：用1.5%的鹽酸溶解步驟S1所得的浸膏，過(guò)濾，得酸液，用25%濃氨 水將其pH調(diào)至10,然后加入2體積倍液的乙酸乙酯，振動(dòng)萃取30-45min，靜置分離，取上層清 液，重復(fù)萃取3次，合并萃取液，減壓回收至膏狀，得粗總堿；
[0040] S4、柱層析分離純化:將步驟S2所得的粗總堿用氯仿溶解，并吸附于2倍量的硅膠 上進(jìn)行拌樣，自然風(fēng)干后，用6體積倍量的粒徑為300目的氧化鋁作為填充劑進(jìn)行柱層析，用 15:1的石油醚-二乙胺進(jìn)行梯度洗脫，控制流速為8-12ml/min，收集洗脫液，以純草烏甲素 為對(duì)照，用薄層色譜TLC跟蹤檢測(cè)，合并主要含有草烏甲素的流份，回收全部溶劑，得草烏甲 素粗品44.3g;
[0041] S5、結(jié)晶純化:將步驟S3所得的草烏甲素粗品用350ml的丙酮溶解，真空濃縮至1/4 體積，再進(jìn)行結(jié)晶和重結(jié)晶，至晶體顏色成均一的白色，得草烏甲素純品25.2g。
[0042] 按2010年版《中國(guó)藥典》對(duì)草烏甲素檢測(cè)項(xiàng)目的要求，用高效液相色譜儀對(duì)實(shí)施例 1-3中草烏甲素的純度進(jìn)行測(cè)定，其中，檢測(cè)波長(zhǎng):260nm;流動(dòng)相：乙腈-0.2%三乙胺水溶液 (用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3 · 1 ±0 · 1) (35:65);填充劑:RP-18。
[0043]純度測(cè)定方法如下：
[0044]取實(shí)施例1-3提供的制備方法所得到的草烏甲酸約20mg，精密稱(chēng)定，置100ml量瓶 中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度， 搖勻，精密量取20μ1注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取草烏甲素對(duì)照品約20mg，同法測(cè)定， 按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。
[0045] 測(cè)定結(jié)果如下表所示：
[0046]
[0047]
[0048] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0049] 1、本發(fā)明用氧化鋁柱層析來(lái)替代硅膠柱層析，氧化鋁經(jīng)處理后可重復(fù)利用，平均 生產(chǎn)每公斤產(chǎn)品可節(jié)約生產(chǎn)成本250-400元，提高了生產(chǎn)效益；
[0050] 2、本發(fā)明用二元系統(tǒng)的石油醚-二乙胺作為洗脫劑，便于回收再利用，有助于減少 環(huán)境污染，且改善了生產(chǎn)操作人員的工作環(huán)境；
[0051] 3、本發(fā)明提供的制備方法得到的草烏甲素純度高，產(chǎn)品質(zhì)量好。
[0052] 以上實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對(duì)其限制；盡管參照前述實(shí)施例 對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解:其依然可以對(duì)前述各實(shí)施 例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換;而這些修改或者 替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明各實(shí)施例技術(shù)方案的精神和范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種草烏甲素的制備方法，其特征在于，包括如下步驟： 51、 選料:選取干燥的滇西烏頭塊根，粉碎至50-100目，備用； 52、 提取:將步驟S1得到的烏頭塊根用95 %的乙醇浸潤(rùn)16-20h，再用8-10倍量的乙醇分 3-5次對(duì)其進(jìn)行提取，合并滲濾液，濃縮至膏狀，得浸膏； 53、 萃取分離：用1.5%的鹽酸溶解步驟S1所得的浸膏，過(guò)濾，得酸液，用25%濃氨水將 其pH調(diào)至10,然后加入1-2體積倍液的乙酸乙酯，振動(dòng)萃取30-45min，靜置分離，取上層清 液，重復(fù)萃取3-4次，合并萃取液，減壓回收至膏狀，得粗總堿； 54、 柱層析分離純化:將步驟S2所得的粗總堿用氯仿溶解，并吸附于1-2倍量的硅膠上 進(jìn)行拌樣，自然風(fēng)干后，進(jìn)行氧化鋁柱層析，用8-15:1的石油醚-二乙胺進(jìn)行梯度洗脫，控制 流速為8-12ml/min，收集洗脫液，以純草烏甲素為對(duì)照，用薄層色譜TLC跟蹤檢測(cè)，合并主要 含有草烏甲素的流份，回收全部溶劑，得草烏甲素粗品； 55、 結(jié)晶純化:將步驟S3所得的草烏甲素粗品用5-8體積倍數(shù)的丙酮溶解，真空濃縮至 1/4體積，再進(jìn)行結(jié)晶和重結(jié)晶，至晶體顏色成均一的白色，得草烏甲素純品。2. 如權(quán)利要求1所述的草烏甲素的制備方法，其特征在于，所述步驟S3的柱層析中氧化 錯(cuò)的用量為粗總堿量的5-8倍。3. 如權(quán)利要求2所述的草烏甲素的制備方法，其特征在于，所述柱層析中氧化鋁的粒徑 為200-300 目。
【文檔編號(hào)】C07D221/22GK106008344SQ201610388293
【公開(kāi)日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年6月3日
【發(fā)明人】左愛(ài)學(xué), 張建英, 沈勇
【申請(qǐng)人】云南中醫(yī)學(xué)院