一種以三聯(lián)吡啶為骨架含苯砜基的順磁熒光雙功能探針的制作方法
【專利摘要】一種以三聯(lián)吡啶為骨架含苯砜基的順磁熒光雙功能探針，為4′-苯砜基-2,2′:6′,2′′-聯(lián)三吡啶-6,6′′-二甲胺四乙酸，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為；所述以三聯(lián)吡啶為骨架含苯砜基的順磁熒光雙功能探針可利用順磁熒光雙功能探針與人體泛素蛋白質(zhì)的連接產(chǎn)物，用于核磁共振的熒光光譜和順磁標(biāo)記。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：該順磁熒光雙功能探針可與蛋白質(zhì)的特定位點(diǎn)進(jìn)行選擇性連接，而且連接具有一定剛性，只有一套順磁信號(hào)峰，而且在激發(fā)光照射下可發(fā)出明顯的金屬離子（Eu3+和Tb3+）的特征熒光；該探針的剛性可以從核磁共振來(lái)衡量，并應(yīng)用到熒光光譜和電子自旋共振中。
【專利說(shuō)明】一種以三聯(lián)吡啶為骨架含苯砜基的順磁熒光雙功能探針

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物學(xué)研究中高性能探針，特別是一種以三聯(lián)吡啶為骨架含苯砜基 的順磁熒光雙功能探針。

【背景技術(shù)】
[0002] 蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)是其生物功能的基礎(chǔ)，因此，研究蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)和動(dòng)態(tài)變 化將有助于我們更深入的了解蛋白質(zhì)如何行使其功能。X射線晶體衍射和高分辨核磁共振 是目前獲得高分辨率蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的兩種主要技術(shù)手段，而相對(duì)于X射線晶體衍射，核磁共 振、熒光光譜和電子自旋共振在研究蛋白質(zhì)動(dòng)態(tài)學(xué)方面具有非常重要的作用。另外，核磁共 振可以在溶液中研究生物大分子的空間結(jié)構(gòu)和功能之間的關(guān)系，并且測(cè)定條件更加接近生 理?xiàng)l件，可不破壞生物大分子的結(jié)構(gòu)，得到的結(jié)果更加接近實(shí)際。
[0003] 蛋白質(zhì)的化學(xué)修飾提供了研究其功能和動(dòng)態(tài)變化的新技術(shù)，這種技術(shù)可以廣泛應(yīng) 用到核磁共振、電子順磁共振和熒光光譜的研究中，借助小分子基團(tuán)及其金屬配合物的磁 學(xué)性質(zhì)和光譜特性，可以獲得大分子蛋白質(zhì)的動(dòng)態(tài)行為、結(jié)構(gòu)變化和作用機(jī)制。但是化學(xué)修 飾蛋白質(zhì)需要強(qiáng)調(diào)位點(diǎn)單一并且剛性的問(wèn)題是目前順磁技術(shù)和熒光能量共振轉(zhuǎn)移研究中 亟需解決的問(wèn)題，另外蛋白質(zhì)-探針鏈接的穩(wěn)定性也是研究中的關(guān)鍵問(wèn)題。
[0004] 生物大分子與順磁探針定點(diǎn)連接以后，由于順磁效應(yīng)，順磁中心附近的氨基酸殘 基的化學(xué)環(huán)境會(huì)產(chǎn)生較大的變化，導(dǎo)致其核磁共振譜峰的化學(xué)位移產(chǎn)生明顯變化。人們就 可以借助采集PCS、PRE或RDC等順磁數(shù)據(jù)來(lái)研究生物大分子的結(jié)構(gòu)、功能以及生物大分子 之間的相互作用，參見(jiàn)J；沿眉7?，2010，46: 101-112。
[0005] Nguyen等人，參見(jiàn)2011，50，692 - 694,將非天然氨基酸 類化合物，如圖1中化合物L(fēng)-1，引入NS2B-NS3蛋白酶中，分別取代NS3中的Q86，H87和 K88,他們發(fā)現(xiàn)只有在H87BpyAla突變體中滴加 Co2+，才有明顯的PCS，Q86BpyAla，K88BpyAla 突變體滴加 Co2+只有PRE，這說(shuō)明在這兩個(gè)位點(diǎn)，順磁標(biāo)簽的柔性比較大。但由于L-1只能和 過(guò)渡金屬離子配位，而在過(guò)渡金屬離子中也只有Co 2+等少數(shù)金屬離子才能測(cè)得明顯的PCS， 可得數(shù)據(jù)較少，所以在一定程度上限制了 L-1的應(yīng)用。
[0006] 等k，參％ J· Am. Chem. Soc. 2009，131，14761 -14767, 報(bào)道了鑭系金屬離子螯合探針D0TA-M8,由于其骨架及臂上都增加了手性誘導(dǎo)基團(tuán)，克服 了如圖1中化合物L(fēng)-2等DOTA類似物骨架和臂的震動(dòng)，參見(jiàn)Inorg. Chem.2W)\ 2342 - 2349,使其與鑭系金屬離子的螯合物具有單一構(gòu)象，從而使D0TA-M8成為一個(gè)有效的 通過(guò)順磁標(biāo)記來(lái)研究生物分子的結(jié)構(gòu)與功能的探針。
[0007] Su 等人，參見(jiàn)泛6?·及/r. 7； 2013，19，1097-1103，報(bào)道了化合物4￥?7]\0^即 圖1中化合物L(fēng)-3,它的體積小，與鑭系金屬離子有很強(qiáng)的結(jié)合能力，并且與鑭系金屬離子 結(jié)合后具有單一的構(gòu)象，能夠與蛋白表面選擇性連接，而且連接后的產(chǎn)物非常穩(wěn)定，可在原 位分析蛋白的結(jié)構(gòu)。
[0008] 利用熒光探針與生物分子相互作用前后光譜信號(hào)的變化，人們可以在不破壞生物 分子結(jié)構(gòu)與功能的條件下對(duì)生物分子的結(jié)構(gòu)和生物過(guò)程進(jìn)行定性及定量的研究。因此，熒 光測(cè)定術(shù)作為一種目前發(fā)展比較成熟的技術(shù)，其在生物體系研究領(lǐng)域也有著很好的應(yīng)用前 景。雖然傳統(tǒng)的有機(jī)熒光探針具有合成簡(jiǎn)單，熒光量子產(chǎn)率較高和易于進(jìn)入細(xì)胞等優(yōu)點(diǎn)，卻 因?yàn)樗鼈兯苄圆睢tokes位移較小、熒光壽命短以及容易被熒光背景干擾等缺陷限制了 它們?cè)谏矬w系中的應(yīng)用。而鑭系熒光探針具有水溶性好、Stokes位移大、熒光壽命長(zhǎng)以 及譜峰窄等諸多優(yōu)勢(shì)，因而可以排除生理環(huán)境中熒光背景的干擾，提高測(cè)定分析靈敏度，從 而彌補(bǔ)了傳統(tǒng)有機(jī)熒光探針的不足。
[0009] Barbara Imperiali 等人，參見(jiàn)7； ▲?· CXe?. 5bc. 2006，128，7346-7352,報(bào)道 了一種可用來(lái)研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的含有15-20個(gè)天然氨基酸并結(jié)合有金屬離子 Tb (III)的多肽探針。借助熒光共振能量轉(zhuǎn)移等手段，他們通過(guò)應(yīng)用此探針來(lái)監(jiān)測(cè)SH2區(qū)域 和不同磷酸肽之間的相互作用以及測(cè)量蛋白質(zhì)-多肽的離解常數(shù)。但此探針的合成需借助 固相合成的手段，合成難度較大。
[0010] Tetsuo Nagano等人，參見(jiàn)7； ▲?·泛￡麗 5bc. 2006, 128，6938-6946,報(bào)道了一系 列鑭系熒光探針，如圖1中化合物L(fēng)n-l-Ln-12,這些探針具有較長(zhǎng)的熒光壽命，利用時(shí)間分 辨熒光實(shí)驗(yàn)，可通過(guò)觀測(cè)探針與亮氨酸氨基肽酶（LAP)反應(yīng)前后熒光的變化來(lái)研究亮氨酸 氨基肽酶的活性。
[0011] 順磁熒光雙功能探針是指特定的有機(jī)配體，它可與順磁金屬離子形成特定的螯合 物，其中鑭系金屬離子起到順磁中心的作用，在探針與生物大分子連接后，順磁中心可對(duì)其 附近的生物大分子的殘基產(chǎn)生影響，使這些殘基的化學(xué)位移值發(fā)生較大的變化，而且在激 發(fā)光的照射下，雙功能探針可產(chǎn)生順磁金屬離子的特征發(fā)射峰。
[0012] 在將順磁熒光雙功能探針應(yīng)用于生物體系中時(shí)，鑭系金屬離子螯合物在激發(fā)光的 照射下可發(fā)射出鑭系金屬離子特征的熒光譜峰，而且可同時(shí)提供順磁中心，那些靠近順磁 中心的氨基酸殘基可產(chǎn)生較大的PCS。由于生物體系中沒(méi)有天然的鑭系金屬離子的結(jié)合位 點(diǎn)，所以即使有過(guò)量鑭系金屬離子的存在，也不會(huì)產(chǎn)生明顯的順磁效應(yīng)和熒光噪音。因此， 順磁熒光雙功能探針在研究生物大分子的結(jié)構(gòu)和功能的過(guò)程中，兼有順磁探針和熒光探針 的優(yōu)點(diǎn)，可獲得更全面的數(shù)據(jù)。
[0013] Saha 等人，參見(jiàn), 1993，76，1361-1378、Mukkala 等人， 參見(jiàn) 7； Am. Chem. Soc., 1993, 115, 11032-1W33、Takalo 等人，參見(jiàn) Helv_ Chim. Jcia·, 1997,80，372-387 和 Nicolas Maindron 等人，參見(jiàn) Crg. 2011， 9，2357 - 2370分別報(bào)道了如圖1中的熒光標(biāo)簽L-4、L-5、L-6和L-7,它們的鑭系金屬離 子（Eu3+)螯合物均有較好的熒光特性，可有效的對(duì)蛋白質(zhì)或多肽進(jìn)熒光行研究。但這些標(biāo) 簽有一個(gè)共同的特點(diǎn)，就是它們與蛋白質(zhì)或多肽的連接有較大的柔性，不適合作為蛋白質(zhì) 或多肽順磁研究的標(biāo)簽。
[0014] Su 等人，參見(jiàn) CXe?.及/r. 7； 2013，19，17141 - 17149,報(bào)道了圖 1 中的化合 物L(fēng)-8,它與鑭系金屬離子有較強(qiáng)的結(jié)合能力，可與蛋白定點(diǎn)連接，且連接后，只有一套順磁 峰，而且可以得到大的PCS和RDC值，并且在340nm的激發(fā)下可以發(fā)出明顯的Tb 3+的特征熒 光。他們運(yùn)用順磁熒光雙功能探針來(lái)解析蛋白質(zhì)的生物結(jié)構(gòu)與功能，能夠同時(shí)得到順磁數(shù) 據(jù)和熒光數(shù)據(jù)，在研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能的過(guò)程中，比單一功能的探針具有更加明顯的 優(yōu)勢(shì)。
[0015] 為了將順磁熒光雙功能標(biāo)簽引入蛋白中，一般是將此標(biāo)簽設(shè)計(jì)為具有雙功能團(tuán)的 小分子化合物，一端能夠螯合順磁金屬離子，另一端可與蛋白質(zhì)連接。合適的連接方式與螯 合基團(tuán)在探針發(fā)揮其作用的過(guò)程中非常重要，因此，在設(shè)計(jì)順磁熒光雙功能探針的過(guò)程中， 必須綜合考慮以下幾個(gè)方面： 1) 與鑭系金屬離子有較強(qiáng)的結(jié)合能力。最好具有較高的齒合度，從而阻止水分子參與 配位，阻止發(fā)生由配體到溶劑的無(wú)輻射能量轉(zhuǎn)移所導(dǎo)致的熒光淬滅； 2) 能夠與蛋白的特定位點(diǎn)選擇性連接，而且連接要有一定的剛性。如果連接剛性不強(qiáng)， 標(biāo)簽會(huì)相對(duì)蛋白進(jìn)行運(yùn)動(dòng)，造成PCS和RDC的平均化； 3) 具有單一的構(gòu)象。如果存在多種構(gòu)象，核磁譜圖中會(huì)出現(xiàn)多套信號(hào)峰，對(duì)核磁譜圖的 分析帶來(lái)困難； 4) 具有較長(zhǎng)的激發(fā)波長(zhǎng)和較高的熒光量子產(chǎn)率。較低的激發(fā)波長(zhǎng)容易對(duì)生物樣品造成 損傷。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0016] 本發(fā)明的目的是針對(duì)上述技術(shù)分析和存在問(wèn)題，提供一種以三聯(lián)吡啶為骨架含苯 砜基的順磁熒光雙功能探針及其制備方法，該順磁熒光雙功能探針可與蛋白質(zhì)的特定位點(diǎn) 進(jìn)行選擇性連接，而且連接具有一定剛性，只有一套順磁信號(hào)峰，而且在激發(fā)光照射下可發(fā) 出明顯的金屬離子（Eu 3+和Tb3+)的特征熒光；該探針的剛性可以從核磁共振來(lái)衡量，并應(yīng)用 到熒光光譜和電子自旋共振中。
[0017] 本發(fā)明的技術(shù)方案： 一種以三聯(lián)吡啶為骨架含苯砜基的順磁熒光雙功能探針，為4'-苯砜 基-2, 2' : 6、2"-聯(lián)三吡啶-6, 6"-二甲胺四乙酸，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為

【權(quán)利要求】
1. 一種以三聯(lián)吡啶為骨架含苯砜基的順磁熒光雙功能探針，其特征在于：為4'-苯砜 基-2, 2' : 6、2"-聯(lián)三吡啶-6, 6"-二甲胺四乙酸，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為
〇
2. -種如權(quán)利要求1所述以三聯(lián)吡啶為骨架含苯砜基的順磁熒光雙功能探針的制備 方法，其特征在于步驟如下： 1) 吡啶-2, 6-二甲酸二乙酯的合成 將吡啶-2, 6-二甲酸和S0C12混合，回流3-12h，蒸出S0C12，然后在冰浴下滴加無(wú)水乙 醇，室溫?cái)嚢?h后濃縮至干，在殘余物中加入水，然后在冰浴下用碳酸鉀中和，用二氯甲烷 萃取，合并有機(jī)相，有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌，并用無(wú)水硫酸鈉干燥，經(jīng)過(guò)濾、旋干，得土黃 色晶狀固體吡啶-2, 6-二甲酸二乙酯； 2) 1，5-二（6-甲酸乙酯-2-吡啶基）-1，3, 5-戊三酮的合成 將氫化鈉和四氫呋喃混合后，氬氣保護(hù)下，升溫至40-50°C，然后滴加吡啶-2, 6-二甲 酸二乙酯、丙酮和四氫呋喃的混合液，反應(yīng)2-8h，冷卻至室溫，倒入冰水中，6M鹽酸溶液調(diào) pH至7,然后濃縮至體積的3/5,冰水冷卻并趁冷過(guò)濾，將濾餅干燥，得橘紅色固體1，5-二 (6-甲酸乙酯-2-吡啶基）-1，3, 5-戊三酮； 3) 4'-羥基-2, 2' :6' 2"-三聯(lián)吡啶-2, 6"-二甲酸乙酯的合成 將1，5-二（6-甲酸乙酯-2-吡啶基）-1，3, 5-戊三酮、乙酸銨和無(wú)水乙醇混合，回流 2-10h，冷卻至室溫，濃縮至干，將殘余物加入水清洗，過(guò)濾后將殘余物溶于二氯甲烷，有機(jī) 相分別用水，〇. 5 Μ的稀鹽酸和飽和食鹽水清洗，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，經(jīng)過(guò)濾、旋干、 柱分離，得黃色固體粉末4'-羥基-2, 2':6、2~_三聯(lián)吡啶-2, 6~_二甲酸乙酯； 4) 4'-溴-2, 2':6、2?-三聯(lián)吡啶-2, 6?-二甲酸乙酯的合成 將4'-羥基-2, 2^6、2?-三聯(lián)吡啶-2, 6?-二甲酸乙酯、五溴化磷和DMF混合，氬氣 保護(hù)下，40_80°C反應(yīng)6-12h,冷卻至室溫后蒸出DMF,在殘余物中加入水后用飽和碳酸氫鈉 中和，用氯仿萃取后合并有機(jī)相，有機(jī)相分別用水和飽和食鹽水清洗，然后用無(wú)水硫酸鈉干 燥，經(jīng)過(guò)濾、旋干、柱分離，得白色固體粉末狀4'-溴-2, 2^6、2"-三聯(lián)吡啶-2, 6"-二甲 酸乙酯； 5) 4、溴-2, 2^6、2?-三聯(lián)吡啶-2, 6二甲醇的合成 將4'-溴-2, 2^6、2…-三聯(lián)吡啶-2, 6…-二甲酸乙酯、四氫呋喃和無(wú)水乙醇混合，然 后加入硼氫化鈉，室溫下反應(yīng)15_30h，加水使反應(yīng)淬滅，旋出有機(jī)溶劑濃縮，過(guò)濾后將濾餅 用紅外干燥，得到白色固體粉末狀4'-溴_2,2': 6、2"-三聯(lián)吡啶-2, 6"-二甲醇； 6. f -溴-6,6?-二溴甲基-2,2\6、2?-聯(lián)三吡啶的合成 將4'-溴-2, 2' : 6'，2…-三聯(lián)吡啶-2, -二甲醇和氯仿混合，攪拌下滴加三溴化磷， 回流2-8h，用飽和碳酸氫鈉溶液中和后用二氯甲烷萃取，合并有機(jī)層，有機(jī)層分別用水和 飽和食鹽水洗，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾后將濾液旋干，得白色固體粉末狀f -溴-6, 6…-二溴甲基-2,2^6、2…-聯(lián)三吡啶； 7) 4'-溴-2, 2^6、2?-聯(lián)三吡啶-6, 6二甲胺四乙酸四乙酯的合成 將4'-溴_6,6?-二溴甲基-2, 2^6、2?-聯(lián)三吡啶、無(wú)水碳酸鉀、碘化鉀、亞氨基二 乙酸二乙酯和無(wú)水乙腈混合，回流2-8h后濃縮至干，加入水，然后用二氯甲烷萃取，有機(jī)相 分別用水和飽和食鹽水清洗后，用無(wú)水硫酸鈉干燥，經(jīng)過(guò)濾、旋干，得淡黃色油狀物，靜置后 變?yōu)榈S色固體4'-溴-2,2':6、2"-聯(lián)三吡啶-6, 6"-二甲胺四乙酸四乙酯； 8) 4'-苯砜基-2, 2^6、2?-聯(lián)三吡啶-6, 6二甲胺四乙酸四乙酯的合成 將4'-溴-2, 2^6、2?-聯(lián)三吡啶-6, 6二甲胺四乙酸四乙酯、苯亞磺酸鈉、碘 化亞銅、喹啉和NMP混合，氬氣保護(hù)下，100-14(TC反應(yīng)5-12h，冷卻至室溫后加入水，然后 用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，有機(jī)相分別用水和飽和食鹽水清洗有機(jī)層，再用無(wú)水硫酸 鈉干燥，過(guò)濾后將濾液旋干、柱分離，得淡黃色油狀物4'-苯砜基-2, 2' :6、2~_聯(lián)三吡 P定-6, 6…-二甲胺四乙酸四乙酯； 9) 4'-苯砜基-2, 2':6、2?-聯(lián)三吡啶-6, 6二甲胺四乙酸的合成 將4'-苯砜基-2, 2^6、2…-聯(lián)三吡啶-6, 6二甲胺四乙酸四乙酯、氫氧化鈉、 THF和水混合，室溫下反應(yīng)2-8h,用濃度為4 Μ的鹽酸溶液調(diào)pH至2~3,濃縮后過(guò)濾，用水 清洗濾餅后用紅外干燥，得到白色固體粉末狀目標(biāo)物4'-苯砜基-2, 2' :6、2~_聯(lián)三吡 啶-6, 6"-二甲胺四乙酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述以三聯(lián)吡啶為骨架含苯砜基的順磁熒光雙功能探針的制備 方法，其特征在于：所述步驟1)中吡啶-2, 6-二甲酸、S0C12、無(wú)水乙醇與水的用量比為 lg:4. 2mL ：5mL ：5mL ； 步驟2)中氫化鈉與四氫呋喃的用量比為lg:20mL，吡啶-2, 6-二甲酸二乙酯、丙酮與四 氫呋喃的用量比為6. 6g: lmL: 22mL ; 步驟3)中1，5-二（6-甲酸乙酯-2-吡啶基）-1，3, 5-戊三酮、乙酸銨、無(wú)水乙醇、水與 二氯甲烷的用量比為 lg: 1. 3g :18mL :25ml :37. 5mL ; 步驟4)中4'-羥基-2, 2':6、2?-三聯(lián)吡啶-2, 6?-二甲酸乙酯、五溴化磷、DMF與 水的用量比為lg: 3g :23mL :30mL ; 步驟5)中4'-溴-2, 2':6、2?-三聯(lián)吡啶-2, 6?-二甲酸乙酯、四氫呋喃、無(wú)水乙醇、 硼氫化鈉與水的用量比為lg:50mL :12mL :0. 4g :15mL ; 步驟6)中的4'-溴-2, 2':6、2…-三聯(lián)吡啶-2, 6二甲醇、三溴化磷和氯仿的用量 比為 lg: lmL ：37. 5mL ； 步驟7)中4'-溴_6,6…-二溴甲基-2, 2':6、2…-聯(lián)三吡啶、無(wú)水碳酸鉀、碘化鉀、亞 氨基二乙酸二乙酯、無(wú)水乙腈與水的用量比為lg: 1. 2g:0. 5g :0. 8mL :50mL :50mL ; 步驟8)中4'-溴-2, 2^6、2?-聯(lián)三吡啶-6, 6?-二甲胺四乙酸四乙酯、苯亞磺酸鈉、 碘化亞銅、喹啉、NMP 與水的用量比為 lg:〇. 35g:0. 023g:0. 02mL:16. 7mL :150mL ; 步驟9)中4'-苯砜基-2, 2^6、2?-聯(lián)三吡啶-6, 6?-二甲胺四乙酸四乙酯、氫氧化 鈉、THF與水的用量比為lg:0. 41g:80mL:80mL。
4. 一種如權(quán)利要求1所述以三聯(lián)吡啶為骨架含苯砜基的順磁熒光雙功能探針的應(yīng)用， 其特征在于：利用順磁熒光雙功能探針與人體泛素蛋白質(zhì)的連接產(chǎn)物，用于核磁共振的熒 光光譜和順磁標(biāo)記，所述順磁熒光雙功能探針與人體泛素蛋白質(zhì)的連接方法如下： 1) 配制10 mM的4'-苯砜基-2, 2' :6、2…-聯(lián)三吡啶-6, 6二甲胺四乙酸標(biāo)簽溶 液； 2) 采集人體泛素蛋白質(zhì)G47C在三羥甲基氨基甲烷（Tris)緩沖液pH=8. 0時(shí)的1H-15N HSQC譜圖作為空白對(duì)照； 3) 在人體泛素蛋白質(zhì)G47C中加1.0倍量的三（2-羧基乙基）膦（TCEP); 4) 將人體泛素蛋白質(zhì)G47C加入5倍量的4'-苯砜基-2, 2' : 6、2"-聯(lián)三吡 啶-6, 6〃-二甲胺四乙酸中，此時(shí)pH為8.0 ; 5) 通過(guò)采集混合物在不同時(shí)刻的1H-15N HSQC譜圖來(lái)監(jiān)測(cè)反應(yīng)，直至反應(yīng)完全； 6) 反應(yīng)完全后，通過(guò)roio脫鹽柱分離產(chǎn)物，將剩余的標(biāo)簽和新生成的小分子出去，最 后得到人體泛素蛋白質(zhì)G47C與4'-苯砜基-2, 2': 6、2"-聯(lián)三吡啶-6, 6"-二甲胺四乙 酸的連接產(chǎn)物。
【文檔編號(hào)】G01N24/10GK104193673SQ201410398008
【公開(kāi)日】2014年12月10日 申請(qǐng)日期:2014年8月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月14日
【發(fā)明者】蘇循成, 劉洪開(kāi), 楊茵, 劉琛欣, 孫季宇 申請(qǐng)人:南開(kāi)大學(xué)