本申請要求于2014年04月07日提交的韓國專利申請第10-2014-0041299號的優(yōu)先權，上述說明書的所有內容通過引用的方式納入本申請。
本發(fā)明涉及提高藥物包封率的高分子微球的制備方法，更詳細地涉及一種高分子微球的制備方法，所述方法包括：制備內水相(W1)和油相(O)的步驟；混合內水相和油相來制備W1/O乳劑并進行冷卻的步驟；與外水相(W2)進行混合來制備W1/O/W2乳劑的步驟；以及干燥并收集已制備的W1/O/W2乳劑的步驟。
背景技術：
相對于普通的快速釋放型(rapid release)制劑，控釋型(controlled release)制劑在體內按規(guī)定時間持續(xù)釋放藥物，因此可長時間保持藥物的有效血藥濃度。因此，可減少因頻繁給予普通的制劑而導致的血藥濃度的波動，并且由此可降低副作用，從而減少給藥頻率，因此具有提高患者的用藥依從性(compliance)的優(yōu)點。
為了開發(fā)這種控釋型制劑，最近正多方面地進行利用生物降解性高分子微球的藥物遞送實驗，生物降解性高分子微球藥物遞送系統(tǒng)可在希望的期間內定量控制藥物劑量，減少副作用，并且提高藥效。
在利用高分子微球的藥物傳遞系統(tǒng)的開發(fā)中，重點之一為如何提高在生產率方面的藥物包封率。
在作為現(xiàn)有技術的美國授權專利US4,954,298中的基于由內水相(W1)/油相(O)/外水相(W2)形成的高分子微球的控釋型制劑中，通過冷卻內水相(W1)/油相(O)乳劑來增加粘度，并由此改善藥物包封率。
但是，為了提高藥物包封率有必要進一步改善工序。
技術實現(xiàn)要素：
技術問題
本發(fā)明人在研究關于制備W1/O/W2型含藥物的高分子微球時可提高藥物包封率的方法的過程中，證實了在特定溫度以下并保持規(guī)定時間的條件下進行將W1/O乳劑混合在W2中來制備W1/O/W2的過程時，藥物包封率有顯著提高，并由此完成了本發(fā)明。
因此，本發(fā)明的目的在于，提供一種高分子微球的制備方法，所述方法包括：制備包含藥物、增稠劑和水性溶劑的內水相(W1)，并制備包含聚合物和脂溶性溶劑的油相(O)的步驟；混合在上述步驟制備的內水相和油相來制備W1/O乳劑，并且冷卻所制備的上述W1/O乳劑來增加粘度的步驟；將在上述步驟中粘度增加的W1/O乳劑分散于包含水溶性溶液且溫度保持在18℃以下的外水相(W2)中，將溫度保持在18℃以下達10分鐘以上，并通過混合來制備W1/O/W2乳劑的步驟；以及干燥并收集在上述步驟制備的W1/O/W2乳劑的步驟。
本發(fā)明的另一目的在于，提供通過上述高分子微球的制備方法制備的高分子微球。
解決問題的方案
為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供高分子微球的制備方法，所述方法包括：制備包含藥物、增稠劑和水性溶劑的內水相(W1)，并且制備包含聚合物和脂溶性溶劑的油相(O)的步驟；混合在上述步驟制備的內水相和油相來制備W1/O乳劑，并且冷卻所制備的上述W1/O乳劑來增加粘度的步驟；將在上述步驟中粘度增加的W1/O乳劑分散于包含水溶性溶液且溫度保持在18℃以下的外水相(W2)中，將溫度保持在18℃以下達10分鐘以上，并通過混合來制備W1/O/W2乳劑的步驟；以及干燥并收集在上述步驟制備的W1/O/W2乳劑的步驟。
為了實現(xiàn)本發(fā)明的另一目的，本發(fā)明提供一種通過上述高分子微球的制備方法制備的高分子微球。
以下，詳細描述本發(fā)明。
本發(fā)明提供一種高分子微球的制備方法，所述方法包括：步驟(a)，制備包含藥物、增稠劑和水性溶劑的內水相W1，并且制備包含聚合物及脂溶性溶劑的油相O；步驟(b)，混合在上述步驟(a)制備的內水相和油相來制備W1/O乳劑，并且冷卻所制備的上述W1/O乳劑來增加粘度；步驟(c)，將在上述步驟(b)中增加粘度的W1/O乳劑分散于包含水溶性溶液且溫度保持在18℃以下的外水相W2中，將溫度保持在18℃以下達10分鐘以上，并通過混合來制備W1/O/W2乳劑；以及步驟(d)，干燥并收集在上述步驟(c)制備的W1/O/W2乳劑。
以下，根據(jù)步驟對本發(fā)明的制備方法進行說明。
在步驟(a)中，制備包含藥物、增稠劑和水性溶劑的內水相(W1)，并且制備包含聚合物和脂溶性溶劑的油相(O)。
在步驟(a)中制備用于制備W1/O乳劑的內水相和油相。本發(fā)明的內水相的特征在于，包含藥物、增稠劑和水性溶劑，油相的特征在于，包含聚合物和脂溶性溶劑。
所述藥物是指適合用于疾病的診斷、處置、緩解、治療或預防或者適合用于其他醫(yī)學目的藥劑、生理學制劑、生物學活性化合物或它們的混合物。本發(fā)明的藥物均包含化合物、肽、蛋白質、抗體、核酸或它們的鹽，優(yōu)選地，可以為水溶性藥物。
更優(yōu)選地，本發(fā)明的藥物可以為具有生理學活性的肽，最優(yōu)選地，可以為醋酸亮丙瑞林。
醋酸亮丙瑞林(Leuprorelin acetate)作為分類為黃體生成素釋放激素(LHRH)激動劑的激素制劑，也被稱為亮脯利特(Leuprolide)、醋酸亮丙瑞林(Leuprorelin acetate)、亮氨酰脯氨酸醋酸鹽(Leuprolide acetate)。在睪酮或雌激素依賴性癌細胞中，使它們缺少激素而起到減少或縮小腫瘤大小的作用，主要適用于乳腺癌、對激素產生反應的前列腺癌、子宮內膜癌、子宮肌瘤、中樞性性早熟的治療，但還可以作為治療其他疾病的目的而使用。
所述增稠劑通過增加內水相的粘度來制備W1/O乳劑，從而提供冷卻時粘度增加的效果。例如，本發(fā)明的增稠劑可以為酪蛋白、明膠、膠原等的高分子化合物，纖維素、糊精、瓊脂等的碳水化合物，黃原膠等的天然橡膠，優(yōu)選地，可以為明膠。
所述水性溶劑是指可溶解作為水溶性的本發(fā)明的藥物的溶劑，通常，不對適合用于藥物溶解的水性溶劑進行限制。本發(fā)明的水性溶劑不限定于此，但是例如，可以為水、碳數(shù)為1至4個的低級醇(例如，甲醇、乙醇、丙醇等)、乙腈、丙酮、四氫呋喃等。優(yōu)選地，可以為乙醇、甲醇、水或它們的混合物。更優(yōu)選地，本發(fā)明的水性溶劑可以為水。
形成內水相(W1)的水性溶劑、藥物和增稠劑的重量比可根據(jù)水性溶劑的種類、藥物的種類而不同，但不限定于此，例如，能夠以水性溶劑：藥物：增稠劑＝1∶0.01～2∶0.01～0.5的重量比混合，優(yōu)選地，相對于1重量份的水性溶劑，能夠以0.05至1重量份的藥物、0.05至0.2重量份的增稠劑的比率進行混合。
能夠以依次混合或同時混合水性溶劑、藥物和增稠劑的方法制備內水相(W1)，優(yōu)選地，可在加溫的條件下混合內水相。優(yōu)選地，所述加溫條件可以為30至80℃，更優(yōu)選地，可以為50至70℃。
所述聚合物是指形成高分子微球的外壁的高分子化合物，本發(fā)明的聚合物只要是在制備高分子微球的過程中使用的本技術領域公知的高分子化合物，就可不受限制，優(yōu)選地，雖然并不限定于此，但是例如，可以為羥基脂肪酸聚酯、聚乳酸(poly(lactic acid))和聚羥基乙酸(poly(glycolic acid))的共聚物、僅由聚乳酸或聚丙交酯形成的聚合物、聚乳酸-乙醇酸共聚物、聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)、聚磷腈、聚亞胺基碳酸酯、聚磷酸酯、聚酸酐、聚原酸酯、乳酸和己內酯的共聚物、聚已內酯、聚羥基戊酸酯、聚羥基丁酸酯、聚氨基酸、乳酸和氨基酸的共聚物及它們的混合物，更優(yōu)選地，可以為聚乳酸和聚羥基乙酸的共聚物。在本發(fā)明的高分子微球的制備方法中使用的聚合物的重均分子量未特別限制，但通?？梢詾?,000至800,000，優(yōu)選地，可以為5,000至100,0000，更優(yōu)選地，可以為10,000至50,000。
所述聚乳酸和聚羥基乙酸的共聚物(PLGA)的乳酸與乙醇酸的摩爾比可以為0至100∶0至100，優(yōu)選地，可以為50至90∶10至50(例如，50∶50、65∶35、75∶25、85∶15、90∶10)，更優(yōu)選地，可以為70至80∶20至30(例如，75∶25)。
所述脂溶性溶劑用于溶解高分子量的聚合物，通常在制備用于控釋型制劑的高分子微球的過程中使用的脂溶性溶劑可不受限制。例如，本發(fā)明的脂溶性溶劑可以為二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷、三氯乙烷、四氯化碳等的鹵代烴，乙醚、異丙醚等的醚類，乙酸乙酯、乙酸丁酯等的脂肪酯，苯、甲苯、二甲苯等的芳香族烴。優(yōu)選地，可以為鹵代烴，更優(yōu)選地，可以為二氯甲烷。
只要是可溶解聚合物的脂溶性溶劑的量，則不進行特別限制，脂溶性溶劑的量可根據(jù)聚合物的種類和脂溶性溶劑的種類而不同，例如，可以為聚合物重量的0.1倍至10倍，優(yōu)選地，可以為0.5倍至4倍，更優(yōu)選地，可以為聚合物重量的1倍至2倍。
油相(W1)可通過在脂溶性溶劑中混合聚合物的方法制備，并可根據(jù)需要，利用混合器(stirrer、mixer)或振蕩器(voltex)進行混合。
在步驟(b)中，混合在上述步驟(a)制備的內水相和油相來制備W1/O乳劑，并且冷卻所制備的上述W1/O乳劑來增加粘度。
在步驟(b)中，在混合在上述步驟(a)制備的內水相和油相來制備W1/O乳劑之后，進行冷卻來增加粘度。
所述W1/O乳劑通過混合內水相和油相的方法制備，所述混合可通過公知的方法進行。例如，所述混合方法可通過不連續(xù)振蕩方法、利用旋槳式攪拌器、渦輪式攪拌器等的攪拌方法、膠體磨法、均質器法或超聲波方法進行，優(yōu)選地，可通過均質器法進行。優(yōu)選地，本發(fā)明的W1/O乳劑可通過在油相中加入內水相，并通過均質器(homogenizer)進行均質化的方法制備。
內水相與油相的混合比可根據(jù)聚合物、藥物、水性溶劑和脂溶性溶劑的種類而不同，例如，雖然并不限定于此，但相對于1重量份的內水相，能夠以1至100重量份的比率混合油相，優(yōu)選地，相對于1重量份的內水相，能夠以1至20重量份的比率混合油相，更優(yōu)選地，相對于1重量份的內水相，能夠以5至10重量份的比率混合油相。
對所制備的W1/O乳劑進行冷卻來增加粘度。
根據(jù)粘度的增加，可提高部分藥物的包封率。但是，僅通過如上所述的W1/O乳劑的粘度增加，在包封率增加效果方面，其增加量存在局限，因此在制備控釋型制劑的方面無法實現(xiàn)足夠的包封率，并且必須需要外水相(W2)的溫度調節(jié)及其保持時間的調節(jié)。
所述冷卻溫度只要是可增加本發(fā)明的W1/O乳劑的粘度的足夠的溫度，就無特別限定，優(yōu)選地，可以為18℃以下。
在步驟(c)中，將在上述步驟(b)中粘度增加的W1/O乳劑分散于包含水溶性溶液且溫度保持在18℃以下的外水相(W2)中，將溫度保持在18℃以下達10分鐘以上，并通過混合來制備W1/O/W2乳劑。
在步驟(c)中，將粘度增加的上述W1/O乳劑分散于外水相(W2)來制備W1/O/W2乳劑。
本發(fā)明的外水相(W2)的特征在于，其包含水溶性溶液。
所述水溶性溶液是指在水性溶劑中溶解有乳化劑(乳化穩(wěn)定劑)的溶液。
所述水性溶劑可以為水、甲醇、乙醇、丙醇等碳數(shù)為1至4個的低級醇、乙腈、丙酮、四氫呋喃或它們的混合物，優(yōu)選地，可以為乙醇、甲醇、水或它們的混合物。更優(yōu)選地，可以為水。
除了乳化劑以外，本發(fā)明的外水相(W2)還可額外地包含用于調節(jié)外水相的pH的合適的緩沖液(buffer)或用于調節(jié)滲透壓的滲透壓調節(jié)劑(例如，甘露醇)。因為所述緩沖液或滲透壓調節(jié)劑可增加藥物的包封率和穩(wěn)定性。
所述乳化劑可以為穩(wěn)定地形成乳劑的公知的乳化劑，例如，明膠、油酸鈉、硬脂酸鈉、月桂基磺酸鈉、十二烷基硫酸鈉(SDS)等的陰離子表面活性劑、Tween80、Tween60等的聚氧乙烯山梨醇脂肪酯(聚山梨醇酯(Polysorbate))、聚氧乙烯蓖麻油衍生物等的非離子表面活性劑、聚乙烯醇、羧甲基纖維素、卵磷脂、透明質酸或者它們的混合物，優(yōu)選地，可以為聚乙烯醇(PVA，polyvinyl alcohol)。
本發(fā)明的W1/O/W2乳劑的制備步驟的特征在于，在保持18℃以下的外水相(W2)的溫度的狀態(tài)下，對粘度增加的W1/O乳劑進行分散，在分散的步驟中也使溫度保持18℃以下達最少10分鐘以上。
在將W1/O乳劑分散于外水相的步驟中，通過將溫度保持18℃以下達最少10分鐘以上，大幅度增加藥物的包封率。這一點在本發(fā)明中第一次公開。
為了將所述分散步驟的溫度保持在18℃以下，上述外水相(W2)的溫度優(yōu)選為18℃，并且可更優(yōu)選為10℃以上且18℃以下。
在外水相(W2)中分散粘度增加的W1/O乳劑并進行混合的方法可通過公知的混合方法進行，與此相關的內容與在制備上述W1/O乳劑的過程中混合內水相與油相的方法中的記載相同。
優(yōu)選地，在外水相(W2)分散粘度增加的W1/O乳劑并進行混合的溫度保持在18℃以下，更優(yōu)選地，可以為10℃以上且18℃以下，最優(yōu)選地，可以為15℃以上且18℃以下。
并且，優(yōu)選地，所述溫度至少需要保持10分鐘以上。當保持時間小于10分鐘時，藥物包封率會急劇下降。更優(yōu)選地，所述保持時間可以為10分鐘以上且120分鐘以下，最優(yōu)選地，可以為30分鐘以上且90分鐘以下。當所述保持時間持續(xù)120分鐘以上時，由于高分子微球的組分，隨著持續(xù)時間的增加，包封率增加程度并不大，因此有可能效率低下。
在本發(fā)明的比較例和實施例中，在各種溫度下保持各種時間的條件下制備W1/O乳劑，并檢測藥物包封率和藥物含量。
其結果，當初始溫度為20℃、25℃時，證實了包封率非常低(比較例1和比較例2)，當初始溫度為18℃且未將所述溫度保持10分鐘以上時，也證實了藥物包封率低至20％左右(比較例3)。
相反地，在將粘度增加的W1/O乳劑分散于外水相(W2)中時，在保持18℃的溫度達10分鐘后，逐漸提高溫度時，證實了藥物包封率明顯得到改善(實施例1)，當將所述溫度保持30分鐘以上時，證實了藥物包封率進一步明顯得到改善(實施例2至實施例4)。
在步驟(d)中，干燥并收集在上述步驟(c)所制備的W1/O/W2乳劑。
在步驟(d)中，通過對上述制備的W1/O/W2乳劑進行干燥，制備高分子微球，并將其收集。
上述干燥可通過為了從所制備的高分子微球去除溶劑而通常使用的常規(guī)方法來進行。例如，上述干燥可通過對所制備的高分子微球進行單純攪拌、加熱、充氮氣等、在減壓條件下攪拌、以調節(jié)的真空條件對溶劑進行蒸發(fā)的方法進行。優(yōu)選地，可通過在減壓條件下進行攪拌來去除溶劑的水中干燥法進行干燥。
所述收集是指從水相中分離并獲得高分子微球，可通過離心分離、過濾等從液相分離固體成分的常規(guī)方法進行。
可對在上述步驟(d)中制備的高分子微球進一步進行如下的清洗步驟，即，將所制備的高分子微球額外地再分散到蒸餾水等中，并進行混合后再收集的清洗步驟。通過如上所述的清洗步驟可去除包含在微粒子表面的藥劑殘留物、外水相(W2)的乳化穩(wěn)定劑等。
并且，可通過凍結干燥等的方法對根據(jù)本發(fā)明的高分子微球的制備方法制備的高分子微球進行固化，從而制備更穩(wěn)定的高分子微球。更優(yōu)選地，可將所制備的高分子微球懸浮于注射用水等的合適的溶液后，混合公知的賦形劑(例如，甘露醇等的糖類)、分散劑等，此后，通過凍結干燥來進行固化。
當通過本發(fā)明的高分子微球的制備方法來制備高分子微球時，可制備高藥物包封率的高分子微球，因此可減少藥物的損失，從而經濟性地制備控釋型制劑。并且，與現(xiàn)有的方法相比，可制備提高藥物含量的高分子微球。
因此，本發(fā)明提供通過本發(fā)明的高分子微球的制備方法來制備的高分子微球。
與通過現(xiàn)有的方法來制備的高分子微球相比，本發(fā)明的高分子微球由于具有高藥物包封率，因此在制備上具有經濟性，并且具有高藥物含量。
通過本發(fā)明的高分子微球的制備方法來制備的高分子微球可根據(jù)包含的藥物種類適用于目標疾病的治療中，因此，本發(fā)明提供包含本發(fā)明的高分子微球作為有效成分的疾病治療用藥學組合物。
所述疾病為可通過包含本發(fā)明的高分子微球的藥物來進行治療的疾病，優(yōu)選地，可為前列腺癌、子宮內膜癌、子宮肌瘤和中樞性性早熟。
本發(fā)明的藥學組合物單獨包含含有藥物有效量的藥物的高分子微球或者還可額外地包含一種以上的藥學上可接受的載體。所述“藥物有效量”是指相比于陰性對照組顯示更多的反應的量，優(yōu)選地，是指用于疾病治療或預防疾病的足夠的量。本發(fā)明的高分子微球的藥物有效量為0.001至1000mg/天/kg體重，優(yōu)選地，可以為0.005至1mg/天/kg體重。但是，所述藥物有效量可根據(jù)疾病及其嚴重程度、患者的年齡、體重、健康狀態(tài)、性別、給藥途徑和治療期等諸多因素而合適地進行改變。
所述“藥學上可接受的”是指如下文中所述的非毒性組合物，即，生理上可接受的且在對人體給藥時不抑制活性成分的作用，并且通常不產生胃腸道疾病、眩暈癥等的過敏反應或與其相似的反應的組合物。本發(fā)明的組合物與所述藥學上可接受的載體一起，可通過本發(fā)明所屬技術領域的公知的方法，并且根據(jù)給藥途徑制備多種劑型。雖然未對給藥途徑進行限定，但其能夠以口服或非口服的方式給藥。作為非口服給藥途徑包括例如經皮、鼻腔、腹腔、肌肉、皮下或靜脈等多種途徑。
以非口服的方式進行給藥時，本發(fā)明的藥學組合物可與合適的非口服用載體一起，以注射劑、經皮注射劑和鼻腔吸入劑的形式根據(jù)本技術領域所屬的公知的方法制備劑型。在制備所述注射劑時，必須需要進行滅菌，并且需要防止細菌和真菌等的微生物的污染。在制備注射劑時，雖然未對合適的載體進行限制，但可以為包含水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液體聚乙二醇等)、它們的混合物和/或食用油的溶劑或分散介質。更優(yōu)選地，作為合適的載體可使用Hank’s液、林格氏液、含三乙醇胺的磷酸鹽緩沖鹽水(phosphate buffered saline，PBS)或注射用滅菌水、10％的乙醇、40％的丙二醇和5％的葡萄糖等的等滲溶液等。為了保護上述注射劑免受微生物污染，還可包含防腐劑、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等的多種抗菌劑和抗真菌劑。并且，在大部分的情況下，所述注射劑還可包含氯化糖或氯化鈉等的等滲劑。經皮給藥劑包含軟膏、乳膏、洗劑、凝膠、外用液、石膏、擦劑、噴霧劑等的形式。上述“經皮給藥”是指通過局部地向皮膚給予藥學組合物使包含在藥學組合物中的有效量的活性成分遞送到皮膚內的方式。這些劑型記載于作為藥物化學通常公知的藥劑配方手冊的文獻中(Remington′s Pharmaceutical Science，15th Edition，1975，Mack Publishing Company，Easton，Pennsylvania)。
除此之外的藥學上可接受的載體可參照以下文獻(Remington′s Pharmaceutical Sciences，19th ed.，Mack Publishing Company，Easton，PA，1995)。
發(fā)明的效果
如上所述，本發(fā)明涉及一種提高藥物包封率的高分子微球的制備方法，更詳細地涉及一種高分子微球的制備方法，所述方法包括：制備內水相(W1)和油相(O)的步驟；混合內水相和油相來制備W1/O乳劑并進行冷卻的步驟；與外水相(W2)進行混合來制備W1/O/W2乳劑的步驟；以及干燥并收集所制備的W1/O/W2乳劑的步驟。本發(fā)明的高分子微球制備方法，通過將固化油相的步驟保持在特定溫度達特定時間以上的過程，來提高藥物包封率，并且可制備具有高藥物含量的高分子微球，因此在制備緩釋型藥物中是有效的。
具體實施方式
以下，通過實施例對本發(fā)明進行詳細說明。
但是，以下實施例僅用于示例性說明本發(fā)明，本發(fā)明的內容并不限于以下實施例。
比較例
通過普通方法制備的微粒子的藥物包封率試驗
比較例1：根據(jù)W1/O乳劑的冷卻的包封率檢測
在0.45g的醋酸亮丙瑞林粉末和0.08g的明膠混合物中添加1g的蒸餾水，在加熱至約60℃的溫度的同時，溶解上述粉末，從而取得W1(內水相)溶液。在4.0g的DL-乳酸-乙醇酸共聚物(重均分子量：10,000-15,000)粉末中添加6.65g的二氯甲烷，并進行渦旋振蕩(voltexing)，從而取得O(油相)溶液。在O溶液中添加W1溶液，通過均質器(homogenizer)進行乳化，從而制備W1/O乳劑。
在使用保持在約3℃的冷卻裝置來提高W1/O相的粘度后，與調節(jié)到25℃的1.0wt％的聚乙烯醇(PVA)水溶液(1250ml，以下體積相同)混合，然后通過高速攪拌機(homomixer，Siverson，L4R)進行攪拌，從而制備W1/O/W2乳劑。在制備乳劑的過程中，溫度持續(xù)保持在約25℃。對所制備的W1/O/W2乳劑進行約4小時的水中干燥，在通過開口部為75μm的濾網進行過濾后，進行離心分離，并收集微粒子。使用蒸餾水對所收集的微粒子進行再分散，在完成混合后，反復進行離心分離，在充分清洗微粒子表面后，對所取得的高分子微粒子進行凍結干燥，從而取得包含醋酸亮丙瑞林的高分子微粒子(以下，稱為“高分子微球”)。對所取得的高分子微球的藥物含量和藥物包封率進行檢測。
通過如下的方法進行高分子微球的藥物含量檢測實驗。
精確獲取50mg的高分子微球，并加入到100mL容量的燒瓶中，用2mL的DMSO完全溶解高分子微粒子后，填充到標記線，并進行超聲波提取而制備試液后，進行液相色譜法來完成檢測。液相色譜法的分析在如下條件中進行。
色譜柱：2.1mm×50mm，Waters ACQUITY CSH C181.7μm
檢測器：紫外線吸收計(波長為220nm)
流速：0.5mL/min
流動相：包含0.2％的三氟乙酸的水/乙腈(75/25，v/v)
實驗結果證實了在以比較例1的條件進行實驗的組中，包含在所干燥的高分子微球中的藥物的含量為3.4％(重量比)，藥物包封率為34.0％。
比較例2：W1/O/W2乳劑制備溫度為20℃的高分子微球的包封率檢測
在0.50g的醋酸亮丙瑞林粉末和0.08g的明膠混合物中添加0.5g的蒸餾水，在加熱至約60℃的溫度的同時，溶解上述粉末，從而取得W1溶液。在4.0g的DL-乳酸-乙醇酸共聚物(重均分子量：10,000-15,000)粉末中添加8.0g的二氯甲烷，并進行渦旋振蕩，從而取得O溶液。在O溶液中添加W1溶液，通過均質器進行乳化，從而制備W1/O乳劑。
在使用保持在約18℃的冷卻裝置來提高W1/O相的粘度后，與調節(jié)到20℃的1.0wt％的聚乙烯醇(PVA)水溶液混合，然后通過高速攪拌機(homomixer，Siverson，L4R)進行攪拌，從而制備W1/O/W2乳劑。在制備乳劑的過程中，將溫度持續(xù)保持在低于比較例1的18℃～20℃，并按時間檢測保持的溫度。保持的溫度如下列表1所示。對所制備的W1/O/W2乳劑進行約4小時的水中干燥，在通過開口部為75μm的濾網進行過濾后，進行離心分離，并收集微粒子。使用蒸餾水對所收集的微粒子進行再分散，在完成混合后，反復進行離心分離，在充分清洗微粒子表面后，收集所述微粒子，并進行凍結干燥來取得高分子微球。以與比較例1相同的方法對所取得的高分子微球的藥物含量和藥物包封率進行檢測。
表1比較例1和比較例2的W1/O/W2制備溫度比較
實驗結果證實了在以比較例2的條件進行實驗的組中，包含在所干燥的高分子微球中的藥物的含量為1.6％(重量比)，藥物包封率為15.0％。
由此，證實了當制備W1/O/W2時，即使將初始溫度設定為20℃后，將溫度保持在18℃的情況下，也無法取得足夠的藥物包封率。
比較例3：W1/O/W2乳劑制備溫度為18℃的高分子微球的包封率檢測
在0.50g的醋酸亮丙瑞林粉末和0.08g的明膠混合物中添加0.5g的蒸餾水，在加熱至約60℃的溫度的同時，溶解上述粉末，從而取得W1溶液。在4.0g的DL-乳酸-乙醇酸共聚物(重均分子量：10,000-15,000)粉末中添加8.0g的二氯甲烷，并進行渦旋振蕩，從而取得O溶液。在O溶液中添加W1溶液，通過均質器進行乳化，從而制備W1/O乳劑。
在使用保持在約18℃的冷卻裝置來提高W1/O相的粘度后，與調節(jié)到18℃的0.25wt％的聚乙烯醇(PVA)水溶液混合，然后通過高速攪拌機(homomixer，Siverson，L4R)進行攪拌，從而制備W1/O/W2乳劑。在制備乳劑的過程中，將溫度持續(xù)保持在低于比較例1的18℃～20℃，與比較例2不同地，按時間保持的溫度，初始由18℃溫度開始，在規(guī)定時間后保持在20℃。并按時間檢測溫度，所檢測的溫度如下列表2所示。對所制備的W1/O/W2乳劑進行約4小時的水中干燥，通過開口部為75μm的濾網進行過濾后，進行離心分離，并收集微粒子。使用蒸餾水對所收集的微粒子進行再分散，在完成混合后，反復進行離心分離，在充分清洗微粒子表面后，收集所述微粒子，并進行凍結干燥來取得高分子微球。以與比較例1相同的方法對所取得的高分子微球的藥物含量和藥物包封率進行檢測。
表2比較例2和比較例3的W1/O/W2制備溫度比較
實驗結果證實了在以比較例3的條件進行實驗的組中，包含的藥物的含量為2.2％(重量比)，藥物包封率為20.2％。
由此，證實了當制備W1/O/W2時，即使將初始溫度設定為18℃后，在10分鐘內將溫度升溫到20℃且持續(xù)保持的情況下，也無法取得足夠的藥物包封率。
實施例：以本發(fā)明的高分子微球的制備方法制備的微粒子的藥物包封率實驗
實施例1：將W1/O/W2乳劑制備溫度保持在18℃達10分鐘以上的高分子微球的包封率檢測
在0.50g的醋酸亮丙瑞林粉末和0.08g的明膠混合物中添加0.5g的蒸餾水，在加熱至約60℃的溫度的同時，溶解上述粉末，從而取得W1溶液。在4.0g的DL-乳酸-乙醇酸共聚物(重均分子量：10,000-15,000)粉末中添加8.0g的二氯甲烷，并進行渦旋振蕩，從而取得O溶液。在O溶液中添加W1溶液，通過均質器進行乳化，從而制備W1/O乳劑。
在使用保持在約18℃的冷卻裝置來提高W1/O相的粘度后，與調節(jié)到18℃的0.25wt％的聚乙烯醇(PVA)水溶液混合，然后通過高速攪拌機(homomixer，Siverson，L4R)進行攪拌，從而制備W1/O/W2乳劑。在制備乳劑的過程中，將溫度從18℃開始，在保持10分鐘的相同溫度后，逐漸升溫，以在60分鐘內達到23℃。按時間檢測溫度，所檢測的溫度如表3所示。對所制備的W1/O/W2乳劑進行約4小時的水中干燥，在通過開口部為75μm的濾網進行過濾后，進行離心分離，并收集微粒子。使用蒸餾水對所收集的微粒子進行再分散，在完成混合后，反復進行離心分離，在充分清洗微粒子表面后，收集所述微粒子，并進行凍結干燥來取得高分子微球。以與比較例1相同的方法對所取得的高分子微球的藥物含量和藥物包封率進行檢測。
表3比較例3和實施例1的W1/O/W2制備溫度比較
實驗結果證實了在以實施例1的條件進行實驗的組中，包含的藥物的含量為8.1％(重量比)，藥物包封率為74.0％。
由此，證實了雖然初始溫度相同，但與在10分鐘內升溫至20℃的比較例3相比，在10分鐘內保持18℃的實施例1的情況下，與比較例3相比，藥物含量和藥物包封率明顯增加至366％。由此，證實了了在制備W1/O/W2類型的高分子微球時，使W2形成溫度從18℃以下開始，并將其溫度保持10分鐘以上，藥物含量和藥物包封率有明顯提高。
實施例2：將W1/O/W2乳劑制備溫度保持在15℃達30分鐘以上的高分子微球的包封率檢測
在0.52g的醋酸亮丙瑞林粉末和0.09g的明膠混合物中添加1.0g的蒸餾水，在加熱至約60℃的溫度的同時，溶解上述粉末，從而取得W1溶液。在4.0g的DL-乳酸-乙醇酸共聚物(重均分子量：10,000-15,000)粉末中添加13.3g的二氯甲烷，并進行渦旋振蕩，從而取得O溶液。在O溶液中添加W1溶液，通過均質器進行乳化，從而制備W1/O乳劑。
在使用保持在約15℃的冷卻裝置來使W1/O相的膠凝化后，與調節(jié)到15℃的0.25wt％的聚乙烯醇(PVA)水溶液混合，然后通過高速攪拌機(homomixer，Siverson，L4R)進行攪拌，從而制備了W1/O/W2乳劑(旋轉次數(shù)：約5000rpm)。在制備乳劑的過程中，將溫度持續(xù)保持在低于比較例4的15℃～20℃，并增加初始低溫保持時間。按時間檢測溫度，所檢測的溫度如表4所示。對所制備的W1/O/W2乳劑進行約4小時的水中干燥，在通過開口部為75μm的濾網進行過濾后，進行離心分離，并收集微粒子。使用蒸餾水對所收集的微粒子進行再分散，在完成混合后，反復進行離心分離，在充分清洗微粒子表面后，收集所述微粒子，并進行凍結干燥來取得高分子微球。以與比較例1相同的方法對所取得的高分子微球的藥物含量和藥物包封率進行檢測。
表4實施例1和實施例2的W1/O/W2制備溫度比較
檢測結果證實了在以實施例2的條件進行實驗的組中，包含的藥物的含量為10.8％(重量比)，藥物包封率為96％。
由此，證實了與實施例相比1，將W2的臨界溫度以下保持時間增加到30分鐘的情況，顯現(xiàn)進一步提高的藥物包封率。
實施例3和實施例4：將W1/O/W2乳劑制備溫度持續(xù)保持在18℃以下的高分子微球的包封率檢測
在0.50g的醋酸亮丙瑞林粉末和0.08g的明膠混合物中添加0.5g的蒸餾水，在加熱至約60℃的溫度的同時，溶解上述粉末，從而取得W1溶液。在4.0g的DL-乳酸-乙醇酸共聚物(重均分子量：10,000-15,000)粉末中添加8.0g的二氯甲烷，并進行渦旋振蕩，從而取得O溶液。在O溶液中添加W1溶液，通過均質器進行乳化，從而制備W1/O乳劑。
在使用保持在18℃(實施例3)或17℃(實施例4)的冷卻裝置提高W1/O相的粘度后，與調節(jié)到18℃(實施例3)或17℃(實施例4)的0.25wt％的聚乙烯醇(PVA)水溶液混合，然后通過高速攪拌機(homomixer，Siverson，L4R)進行攪拌，從而取得W1/O/W2乳劑。在制備乳劑的過程中，將溫度持續(xù)保持在18℃以下，并按時間檢測溫度，保持溫度如表5所示。對所制備的W1/O/W2乳劑進行約4小時的水中干燥，在通過開口部為75μm的濾網進行過濾后，進行離心分離，并收集微粒子。使用蒸餾水對所收集的微粒子進行再分散，在完成混合后，反復進行離心分離，在充分清洗微粒子表面后，收集所述微粒子，并進行凍結干燥來取得高分子微球。以與比較例1相同的方法對所取得的高分子微球的藥物含量和藥物包封率進行檢測。
表5實施例2至實施例4的W1/O/W2制備溫度比較
檢測結果證實了在以實施例3的條件進行實驗的組中，藥物的含量為10.3％(重量比)，藥物包封率為94％。并且，證實了在以實施例4的條件進行實驗的組中，包含的藥物的含量為10.4％(重量比)，藥物包封率為95％。
由此，證實了將W2保持在15℃至18℃的情況，與現(xiàn)有制備方法相比，大幅度提高了藥物包封率，因此通過成功的藥物封裝實現(xiàn)高分子微球的制備是可行的。
產業(yè)上的可利用性
因此，本發(fā)明涉及一種提高藥物包封率的高分子微球的制備方法，更詳細地涉及一種高分子微球的制備方法，所述方法包括：制備內水相(W1)和油相(O)的步驟；混合內水相和油相來制備W1/O乳劑并進行冷卻的步驟；與外水相(W2)進行混合來制備W1/O/W2乳劑的步驟；以及干燥并收集所制備的W1/O/W2乳劑的步驟。本發(fā)明的高分子微球的制備方法，通過將油相固化的步驟保持在特定溫度達特定時間以上的過程，來提高藥物包封率，并且可制備具有高藥物含量的高分子微球，因此在制備緩釋型藥物中是有效的，進而使其在產業(yè)上的可利用性高。